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肠炎沙门氏菌SEFA基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立,肠炎沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌肠炎,小儿沙门氏菌肠炎,肠炎沙门氏菌疫苗,sefa认证,sefa认证是什么,美国sefa家具会员单位,sefaterzi,sefa英文名
第32 卷 第1 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 32 ，No.1
2010 年 1 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Jan. 2010
肠炎沙门氏菌SEFA 基因表达和间接
ELISA 检测方法的初步建立
1# 1# 1 2 1*
朱春红 ，吴 娟 ，张伟娟 ，陆光富 ，朱国强
(1. 扬州大学兽医学院，江苏扬州 225009 ；2. 江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州 225300)
摘 要：为了给临床检测肠炎沙门氏菌的感染和血清学调查提供一种切实可行的方法，本研究根据肠炎沙门
氏菌SEF14 菌毛操纵子亚单位sefA 基因序列设计一对引物，利用PCR 技术从国内标准株CMCC(B)50336 中扩增
sefA 基因，并按预定的阅读框插入表达载体pET22b+ 中，获得重组质粒pET-sefA ，限制性内切酶结合琼脂糖凝
胶电泳分析和序列测定结果表明，该序列大小为498 bp ，与已发表的sefA 结构编码序列完全一致。重组质粒
pETsefA 转化大肠杆菌E. coli BL21(DE3) 并能获得高效诱导表达，通过对菌体裂解上清液SDS和western
blot 分析鉴定，该重组菌可以表达大小为 15.2 ku 的可溶性重组蛋白rSEFA 。纯化的rSEFA 免疫小鼠所得高免血
清以及标准株CMCC(B)50336 感染小鼠后所获阳性血清，均能识别标准株肠炎沙门氏菌SEF14 菌毛蛋白以及纯
化的重组蛋白rSEFA ，结果表明明体外表达的rSEFA 蛋白有较好的免疫原性和反应原性。而基于rSEFA 介导的
间接ELISA 有较好的特异性，对肠炎沙门氏菌特异性抗体检测有潜在的应用前景。
关键字：肠炎沙门氏菌；SEF14 菌毛；sefA ；间接ELISA
中图分类号：S855.1 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2010)01-0044-05
Expression of subunit s e fA of S . enteritidis SEF14
fimbriae and establishment of an indirect ELISA
1# 1# 1 2 1*
ZHU Chun-hong , WU Juan , ZHANG Wei-juan , LU Guang-fu , ZHU Guo-qiang
(1. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;
2. College of Jiangsu Animal Science and Veterinary Medicine, Taizhou 225300, China)
Abstract: The subunit sefA gene of SEF14 fimbriae from Salmonella enteritidis was amplified by PCR using a pair of primers
derived from reference strain CMCC(B)50336 genomic DNA. The PCR products was cloned into the expression vector pET22b+
an
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