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高效液相色谱法的优点和常见问题 ? ? 高效液相色谱(High Pe-rformance Liauid Chromatography，HPLC)的主要优点是： ⑴分辩率高于其它色谱法 ⑵速度快，十几分钟到几十分钟可完成； ⑶重复性高； ⑷高效相色谱柱可反复使用； 5) 自动化操作，分析精确度高 根据分离过程中溶质分子与固定相相互作用的差别，高效液相色谱可分 四 基本类型，即液－固色谱、液－液色谱、离子交换色谱和体积排阻色谱。 高效液相色谱在生物领域中广泛用于下列产物的分离和鉴定： ⑴氨基酸及其衍生物； ⑵有机酸； ⑶甾体化合物； ⑷生物硷；⑸抗菌素； ⑹糖类；⑺卟啉； ⑻核酸及其降解产物； ⑼蛋白质、酶和 肽；⑽脂类等。???? 高效液相色谱法的优点和常见问题 高效液相色谱的常见问题有： ?1、涡流扩散(Eddy diffusion) 　　流动相碰到较 的固体颗粒，就像流水碰到石头 样产生涡流。如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一， 样涡流扩散小，柱效率高。 ?2、分子扩散(Molecular diffusion) 分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物质停留时间长，则扩散严重。 高效液相色谱法的优点和常见问题 ?3、质量转移(Mass transfer)　　 被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向 移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。 ? ?4、动相流速 当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。 ?5、固定相颗粒大小 　　定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动 高效液相色谱法的优点和常见问题 ? 南京科捷主营业务： 1、销售本公司制造的色谱仪，以及进口和国产的各类色谱仪、色谱仪配件、各种色谱柱、色谱标样及色谱试剂；兼营其他各种分析仪器、相关配件和试剂。 2、专业维修各类进口和国产的气相色谱仪、高效液相色谱仪、紫外分光光度计、原子吸收分光光度计、红外光谱仪、核磁共振以及原子发射光谱等分析仪器。 3、帮助客等技术咨询服务，真正让客户“买得放心，用得安心”。 4、本公司对外承接各类气体、液体以及固体产品的分析检测任务；并承接家居空气质量、饮用水质量等与生活安全有关的监控分析，给出权威的检测报告。 南京科捷提供的产品在全国各地匀有销售(025，欢迎您登录我们公司网站： 、 ， ,了解科捷产品信息 1