环境中微生物的检测与分离纯化实验报告.docVIP

环境中微生物的检测和分离纯化 实验原理 1.微生物的分离与纯化 土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。 微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。 2.平板菌落计数法 将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。 实验材料与试剂 土壤稀释溶液 取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。 实验步骤 （一）.无菌平板制备 采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板 （二）.周围环境中微生物的检测 取一平板，分成6个区，做好标记。同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头 在六个区上涂抹。（平板1） 取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。（平板2） 在培养基上方抖动头发数次。（平板3） 取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。（平板4） 用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。（平板5） 取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1分钟。（平板6） 取一平板，打开盖，咳几下。（平板7） （三）.从土壤中分离微生物 1.采土样 2.制备土壤稀溶液 3.涂布 吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟 4.培养 将培养基平板倒置于37℃下培养24小时 5.菌落计数 四．实验结果 1.平板1：从未洗到用酒精消毒总体趋势是菌落数越来越少，用自来水洗过和用洗手液洗过一遍的菌落数差不多； 平板2：旧纸币和硬币的菌落数要多； 平板3：抖头发的地方附近长出许多菌落； 平板4：自来水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“牛”字形，和当时划线的形状一样，再其次是豆浆； 平板5：划线的地方长出许多菌落； 平板6：放在试验台上的平板长出各种形状的菌斑菌块，在酒精灯旁的基本没有菌落； 平板7：咳几下的基本没有菌落。 2. 三张平板均被大片菌苔完全覆盖，无法计数。 实验讨论 有关洗手液我了解到大部分洗手液都只有杀菌而没有除垢作用，因为其中含有60%到70%的酒精，酒精含量低于60%，杀菌效果会很差，我们用的洗手液可能是酒精含量偏低，所以只用洗手液洗手是不够的。最好的洗手方法是，先用肥皂洗手去除污垢，再使用洗手液杀菌润肤。牙垢中的细菌主要是正常口腔内存在的链球菌、厌氧菌等。牙垢堆积到一定厚度之后，其内部紧挨牙齿表面的细菌因为与空气隔绝开始转入无氧呼吸。无氧呼吸在此处产生的酸不能及时被唾液冲走，因此会腐蚀珐琅质中的矿物成分，并进一步促进龋齿的形成。在牙根处堆积的牙垢也会刺激牙龈，导致牙周炎等牙周疾病。 第二个实验失败的原因可能是滴加的溶液过多，或是取液位置不对细菌浓度很大