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植物显微技术 生物显微镜 常用植物制片技术 一、徒手切片法 一、徒手切片法 二、石蜡切片法 1、取 材 常用固定液： ３、脱 水 4、透 明 5、浸 蜡 6、包 埋 7、修块与固着 8、切 片 9、粘片、展片、烤片 10、染色封片 10、染色封片 三、冰冻切片法 四、涂片法 五、压片法 六、离析法 七、整体装片法 八、植物显微化学（组织化学）制片 组织化学方法 皂苷主要分布在基本组织内, 有小维管束分布的区域皂苷积累最丰富, 薯蓣皂苷元的含量也最高; 其次是无维管束分布的区域; 有大维管束分布的区域皂苷积累最少, 薯蓣皂苷元的含量最低。雄株的皂苷元含量均明显的高于雌株, 雌雄同株其含量界于雄株和雌株之间。 Black---lipid(脂类) Red---polysaccharide Blue---protein(蛋白质) (多糖) 绞股蓝总皂甙含量与其营养器官和生长期相关性的研究 胡正海,2004,《中草药》 盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期薯蓣皂苷元含量的差异性研究 胡正海,2003,《西北植物学报》 不同营养器官中绞股蓝总皂甙含量叶最高，茎次之，根茎和根最低；绞股蓝地上部分总皂甙含量从营养生长→开花→结果不同生长期呈现由低→高→低的变化趋势；其中7、8、9 月的开花期绞股蓝总皂甙含量达到顶峰 * * 光学显微镜 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 显微镜的种类 单式显微镜 放大镜 复式显微镜 普通光学显微镜 研究显微镜（与数码技术结合） 红外显微镜 荧光显微镜 离心显微镜 偏光显微镜 相差显微镜 干涉差显微镜 倒置显微镜 暗视场显微镜 体视显微镜（解剖镜） 电子显微镜 植物制片的分类 按保存时间分 按制作方法分 活体观察 切片法 非切片法 临时制片 永久制片 切片法 徒手切片法 石蜡切片法 冰冻切片法 植物显微化学（组织化学）制片 涂片法 压片法 离析法 整体装片法 非切片法 1、准备 　　显微镜、镊子、解剖针、刀片、培养皿、载玻片、盖玻片、绸布或纱布、染料 2. 切片 　　2~3 cm的材料一段，用左手大拇指或食指夹住材料，上方突出于手指2~3 mm，不宜太高，否则材料容易摇动。右手以拇指和食指拿稳刀片即可切片。切片时为了避免材料干枯，应使材料的切面和刀刃上保持有水，呈湿润状态。每切2~3片后，移入盛有清水的培养皿中。 　　如果切面倾斜，应立即纠正。 　　过于柔软的器官，例如幼嫩的叶片，需用胡萝卜根或马铃薯块茎等作为支持物，将要切的材料夹于其中，然后进行切片。 　　选择比较完整的切片进行染色和封片。 3. 染色 　　染色的方法很多，视材料的要求不同，选用不同的染料。 4. 封片 　注意尽量防止产生气泡，封片完毕后，用纱布擦去多余水， 即可在显微镜下观察。 　　石蜡切片技术是显微技术上最重要最常用的一种方法，优点在于（1）应用范围广，几乎适用于所有的植物材料；（2）能切成极薄而且连续的切片，较清楚地显现细胞、组织的细微结构；（3）切片可以长期保存，便于以后观察比较。因此，这项技术自18 世纪创建以来，在植物细胞、组织研究史上发挥了重要作用，并且在今后仍将作为一项常规技术而发挥作用。 　　石蜡切片技术的整个过程较复杂，可大体概括为： 取材　　　固定　　　脱水　　　透明　　　浸蜡　　　包埋　　　修块　　　切片　　　粘片　　　脱蜡复水 染色　 　　脱水透明 封片 根据观察目的不同，选用合适的新鲜材料，要求“精而小”, 不在于“大而多”，应注意： 　　①取材的代表性。 　　②材料新鲜，大小在0.5—1厘米，有利于固定液的透入。 　　③刀片锐利，立即固定，如不能即刻固定，须尽量防止变 干、损伤。 　　④详细记录日期、采集地点、标本名称、取材部位、固定液种类。 2、固 定 　　用一定的化学溶液（固定剂）在尽可能保持细胞生活结构的情况下迅速杀死组织的过程。 　　作用： 　　①防止组织溶解及腐败； 　　②使细胞内各种成分沉淀保存下来，保持它原有的生活结构； 　　③使细胞内的成分产生不同的折射率，造成光学上的差异，便于观察； 　　④使细胞硬化不容易变形，利于固定以后的处理。 酒精—甲醛—醋酸（简称F.A.A） 固定液 适用范围： 　　是生物制片中最常用的一种良好固定液和保存液。一般植物的器官和组织均可用此液来固定，称为“标准固定液”或“万能固定液”。 配法: 50%或70%酒精 90毫升 冰醋酸 　　 5毫升 甲醛 　　　 5毫升 材料在此固定液中，固定24小时即可进行脱水步骤