诱导根癌农杆菌vir区基因表达水稻代谢物的分离.pdfVIP

维普资讯 f 有机化学 YOUJ[HUAXUE 1995，15，72～75 研究简报 诱导根癌农杆菌 ，，区基因表达水稻代谢物的 _-、 ．_72，一 分离、鉴定和生物活性研究≠ 7·／ 1 刘 煜 黄志纾 肖剑国 古练权 (中山大学化学系，广东，广州l，51~)275) 许 东晖 李宝健 (中山大学生物工程研究中心，广东，广朋l，510275) 吴厚铭 马 侃 (中旨科学院 t海有机所，生命有机化学国家重点宴验室，上海，200032) A 摘要：从孕穗期至开花期水稻(-zasatireLc】ndiaIR72)的茎叶提取液中，筛选并分离出二种能高教 诱导根癌农杆菌(grobacteriumtumfaciens)vir区基因表达的信号分子，这两种信号分子的化学结构分男是 5， 7， 一三羟基一3／-5一二甲氧基黄酮和 5，4，一二羟基一3，5-二甲氧基一7一声一D一葡萄糖氧基黄酮。 ^关毽词： ，农杆菌v区基因，诱导因子，蒸查分离，鉴定 }良1良千龟 利用根癌农杆菌Tj质粒转化系统介导外源基因进入单子叶植物 (如水稻、玉米、小麦等)， 从而使其获得所期望的各种遗传特性，是 目前遗传工程的重大研究课题之一 ” 在根癌农杆菌介 导的转化系统中，携带外源基因的 T—DNA 的切割、加工和转移等一系列复杂的分子生物学过 程是 由Tj质粒的 曲 毒性 区基因调控的。 区基因活化与表达需要两个条件：一是植物细胞分 泌出能诱导 区基因表达的信号分子 ；二是农杆菌对信号分子的识别和反应 。迄今为止，已 鉴定的信号分子主要有乙酰丁香酮 (As)和羟基 AS等 ‘它们都是从烟草等双子叶植物中分离得 到的。从单子叶植物中分离信号分子的工作一直未能取得成功 因此单子叶植物难于被农杆菌转 化的原因，被认为可能是单子叶植物不能产生或缺乏特定 的能有效调节农杆菌 f，区基因表达的 信号分子 1993年，Xu等发现孕穗期至开花期的水稻茎叶抽提渡可 诱 导根癌农杆菌 曲 区基因的活化和表达 这一结果引起了国内外植物基因工程界的广泛注意。本研究结果证明了 水稻这类单子叶植物同样也能分泌 出能诱导 vfr区基因表达的信号分子 与此同时，我们还从水 稻叶片中分离出新的脲类衍生物，并发现该物质能强烈抑制根癌农杆菌的生长及其 毒性区的 基因表达 这样，我们就从分子水平上很好地解释了单子叶植物难于被农杆菌转化的原因，并 为利用农杆菌Tj质粒转化系统介导外源基因进入单子叶植物提供了新的理论基础 我们从孕穗期至开花期水稻(oryazsatireL． ．IndicaIR72)的茎叶抽提物经硅胶柱层析 分步结晶纯化后，得到二种黄酮类化合物。这二种化台物能高教诱导根癌农杆菌(Agrobacterium tumerfaciens)中vir：：lacZ融合基因的有效表达 1994-06-06收稿，1994-08—18修回 广东省青年科学基金和中国科学 院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室基金资助项 目 - ~-本文为水稻茎叶中生物活性物质研究的系列报道 维普资讯 第 1期 诱导根癌农杆菌 v／r区基因表达水稻代谢物的分离、鉴定和生物活性研究 73 结果与讨论 根据 UV．IR．NMR、MS数据，结合文献 ，确定化合物 A为 5，7，4，一三羟基一3，5-二 甲氧基黄酮，与Tricin (小麦黄素)为同一化合物，其结构见图 l。 7