凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点(论文资料).pdfVIP

实验六 凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 .一 实验原理 等 电 聚 焦 (isoelectricfocusing) 又 称 电 聚 焦 (elcctrofocusing) 、 聚 焦 电 泳 (fousielectrophoresis)等。 蛋白质(酶) 、多肽等两性电解质，其所带电荷的性质和数量，随所处环境的 pH 而变 化。环境pH 低于其等电点时，带正电荷，在电场中向阴极移动；环境pH 高于其等电点 时，带负电荷，在电场中向阳极移动；当环境的pH 等于其等电点时，则不带电荷，在电 场中不移动。据此，在电泳系统中创造一个由阳极至阴极，pH 由低到高(即环境由酸变碱) 的连续而稳定pH 梯度环境，那么处在这种系统中具有不同等电点的各种蛋白质，将据所 处环境的pH 与其自身等电点的差别，分别带上正电荷或负电荷，并向与它们各自的等电 点相当的 pH 环境位置处移动，当到达该位置时即停止移动，从而各自焦聚(聚焦) ，分别 形成一条集中的蛋白质区带( 图 41—1)。这种根据蛋白质等电点的不同而将它们分离开的 电泳方法称为等电聚焦电泳。电泳后测定各种蛋白质聚焦部位的 pH ，即可得知它们的等 电点。