倍他洛尔立体拆分菌株的筛选与鉴定.pdf

第39卷第3期 工业微生物 Vd．39No．3 2009年6月 Industrial Jun．2009 Microbiology doi：10．3969／j．issn．1001—6678．2009．03．004 倍他洛尔立体拆分菌株的筛选与鉴定 李永红1”， 黄利华1’2， 刘宏民”， 黄科学4’5 (1．郑州大学新药研究开发中心，河南郑州450052；2．郑州大学化学系，河南郑州450052； 3．郑州大学药学院，河南郑州450001；4．湖南师范大学生命科学学院，湖南长沙410081； ofMicrobial 5．Company ID，USA) 摘 要 从土壤中分离到的52株微生物中，经筛选得到一个能立体选择性水解倍他洛尔中间体 DNA序列最后确定其 的茵株。根据个体形态特征和茵落形态特征初步确定其为红酵母，根据16S 为胶红酵母(Rhodotoru／a 研究。 关键词：菌株筛选； 鉴定；倍他洛尔； 立体选择性水解 p-受体阻滞剂类药物中起作用的主要是其S异 1材料与方法 构体n】。S异构体降低眼内压的能力比其R．异构 体强25．9％左右【2】，其有效作用时间也比外消旋体 1．1仪器 和R_异构体要长得多【3】。目前用于治疗青光眼的 即是S倍他洛尔(4，5]。因此研究开发S倍他洛尔对燥箱；HYG—IIfl型迪转式自动摇瓶柜；恒温恒湿培 减毒增效、提高人们的身心健康有重要的科学意义 养箱；CS-930型薄层扫描光谱仪；341型旋光仪；超 和社会意义。 净工作台；Syltech 手性化合物的拆分方法有化学拆分法、物理拆 分法和生物拆分法三种，由于生物拆分法所得产物 Micro高分辨四极杆一飞行时间串联质谱仪；pH计。 单一、杂质少、成本也较低，因此受到了人们极大的 1．2材料和试剂 关注。其中酶法具有拆分效率高、立体选择性强、反 麦芽由奥克啤酒厂提供，底物为自制。乙酸乙 应条件温和、符合环保要求等优点，它们在手性化合 酯、琼脂粉、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、丙酮及其它试 物制备中的应用逐渐受到研究人员的重视。酶法与 剂均为分析纯。 化学法的结合将是手性化合物合成的新途径。 1．3菌株的筛选和鉴定 生物转化所用的酶几乎都来源于微生物，因此 1．3．1样品来源 本研究旨在筛选能够立体选择性水解倍他洛尔中间 来自郑州一些饭店、油厂附近被油脂污染的15 体(见图1)的微生物，为利用化学．酶法制备倍他洛 份土样。 尔的研究奠定基础。 1．3．2培养基 2， 飞 富集培养基(∥L)I(NH,)2S042，K2HP04 NaCl ≯ 0．5，MgS04·7H200．5，pH自然。灭菌、冷却 T 后加入底物的乙醇溶液或丙酮溶液。第1次富集时 图1待拆分化合物的结构式 培