应用腺病毒载体介导RNA干扰技术构建糖皮质激素受体基因阻断地人U937巨噬细胞模.pdfVIP

中国临床康复 第 卷 第 期 10 29 2006-08-10出版 ChineseJournalofClinicalRehabilitation,August102006Vol.10No.29 89 ·基础研究· 应用腺病毒载体介导 RNA干扰技术构建糖皮质激素受体基因阻断的 人U937巨噬细胞模型☆ 1 1 1 2 3 4 1 1 张 方 ,辛晓峰 ,施 毅 ,刘玉秀 ,钱桂生 ,罗向东 ,赵 明 ,李子玲 1 2 解放军南京军区南京总医院,呼吸内科,科研科,江苏省南京市 成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒 3 210002;解放军第三军医大学新桥 医院呼吸研 究所,重庆市 pRNAT-H1.1/Adeno中,在含有pAdEasy-1病毒骨架的BJ5183大肠杆 4 400037;解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所,重庆市 400040 菌内进行同源重组;重组子通过脂质体介导转染293T细胞,并在 293T 张 方 男, 年生,安徽省庐江县人,汉族, 年解放军第三军 ☆, 1972 2005 细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒,通过反复感染扩增病毒以达到 医大学毕业,博士,主治医师,主要从事肺部感染和急性肺损伤的病理 感染靶细胞的适当滴度,通过绿色荧光表达来监控腺病毒扩增;应用 生理机制研究。 法检测 巨噬细胞感染后糖皮质激素受体蛋白的表达。 Westernblot U937 中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:1671-5926(2006)29-0089-03 收稿日期 修回日期 · 结果:转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光,随着时间逐渐增强, :2006-01-06 :2006-01-25 (05-50-12-10018/GLL) 并且出现明显的细胞病变效应,经过 轮扩增,病毒达到合适的滴度。 3 Constructionofglucocorticoidreceptorgeneblockmodelin 受腺病毒感染的U937巨噬细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低。 humanmacrophageU937withRNAinterferencemediatedby 结论:可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNA干扰腺病毒载体。 adenovirusvector 主题词:受体,糖皮质激素;腺病毒科;基因;转录,遗传 1 1 1 2 3 ZhangFang,XinXiao-feng,ShiYi,LiuYu-xiu,QianGui-sheng,Luo 4 1 1 Xiang-dong,ZhaoMing,LiZi-ling