多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球系膜细胞细胞外基质及其降解基因表达的影响.pdfVIP

·28· ·基础研究· 多囊蛋白1氨基段融合蛋白对肾小球 系膜细胞细胞外基质及其降解 基因表达的影响 关天俊梅长林王文靖 付莉莉 赵海丹蔡厚安 【摘要】 目的研究多囊蛋白．1氨基段(PC．1NF)融合蛋白对大鼠肾小球系膜细胞(RMC) Ⅳ型胶原及其降解调控基因表达的影响。方法用实时荧光定量RT—PCR法检测PC．1NF融 合蛋白对RMC 1V型胶原和细胞外基质(ECM)降解调控基因基质金属蛋白酶、金属蛋白酶1组 织抑制剂(MMP一2、TIMP．1)表达的作用。ELISA方法检测培养的细胞上清液中Ⅳ型胶原含量 的变化。免疫细胞化学方法观察融合蛋白对细胞核因子c-iun和c—fos表达的影响。Western印 迹检测融合蛋白对蛋白激酶C(PKC)一仪信号转导通路的影响。结果4mg／LPC一1NF融合 蛋白作用48h后，RMC1V型胶原mRNA从(103_+16)降至(82±11)拷贝／106GAPDH，与对照组 mRNA 比较差异有统计学意义(P0．05)，培养上清液中的Iv型胶原含量也明显降低；MMP2 从(1150_+90)升至(2770_+170)拷贝／106GAPDH，与对照组比较差异有统计学意义(P0．01)， 而TIMP．1mRNA从(5530_+480)降至(3040_+370)拷贝，106GAPDH，与对照组差异有统计学意 义(P0．01)。DAB染色显示，融合蛋白作用后，RMC的c。j．n和c—fos表达受到明显抑制。 RMC经不同浓度PC—INF融合蛋白作用48h后，随着融合蛋白浓度升高，PKC一仪的表达逐渐 减弱。 结论PC．1NF融合蛋白可通过上调促进ECM降解的MMP．2和抑制ECM降解的 TIMP．1之间的比值而促进Ⅳ型胶原降解；还可能通过PKC．d信号转导通路，抑制c—jun和C— fos表达，从而抑制RMC的增殖和ECM的合成。 【关键词】 常染色体显性多囊。肾病； 细胞外基质； 多囊蛋白1； 系膜细胞 EffectofN·-terminal fusion of on IV and fragmentproteinpolycystin-1collagensynthesis in cells Tian rat GUAN degradationglomerularmesangial jun，MEIChang—lin，WANG Hou一帆．Division Hal—dan，CAI Wen-ring，FULi—li，ZHA0 ofNephrology，ChangzhengHospital， 200003，China Shanghai author：MEI CorrespondingChang—lin，Email：chlmei@publicl．sta．net．cn 【Abstract】 To theeffectofN—terminal Objectiveinvestigate fragment(LRR—WSC)fusion of IV and inrat (PC一1NF)on synthesisdegradation proteinpolycystin一1 collagen glomerular cellsandto itsmechanism．MethodsRat cellswere mesangial mesangial explore glomerular