第三讲免疫细胞功能测定.pptVIP

【实验结果】 小吞噬 大吞噬 实验二E花环形成实验 实验原理 CD2是人T细胞独特的表面标志。 在一定的条件下，绵羊红细胞（SRBC）与T细胞表面的CD2结合，使SRBC环绕在T细胞的周围，形成玫瑰花样的细胞团。 E花环实验原理示意图 + 油镜下E花环形态 【临床意义】 E花环形成实验可作为人外周血T细胞的鉴定和计数，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标，也是分离T细胞的常用方法之一 。 E花环形成实验应用最广泛的是总E花环实验（Et）以及活性E花环实验（Ea）。 【临床意义】 E花环形成率= E花环阳性细胞数/总T细胞数×100% 正常值为68±9.9% E花环降低：免疫缺陷性疾病、病毒感染 E花环增高：甲亢、慢性肝炎、移植排斥反应 实验三淋巴细胞转化实验 淋巴细胞在体外培养时，当受到非特异刺激物如植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）、美洲商陆（PWM）等有丝分裂原刺激后，转化为淋巴母细胞并且发生特征性的形态变化 【实验原理】 【实验原理】 转化和未转化淋巴细胞的形态特征 淋巴母细胞 lymphocytoblast 淋巴细胞转化率 转化率 ＝ 已转化的淋巴细胞数 淋巴细胞总数 × 100％ 临床意义 【正常参考值】 形态学检查法：70%左右 LTT 50%～60%为转化偏低； LTT ＜50%为转化低下。 由PHA刺激而测得的淋巴细胞转化率可反映受试者T细胞总体水平的应答功能。 临床意义 LTT＞正常值，见于Down综合症 LTT＜正常值，见于细胞免疫缺陷或功能低下者，如运动失调性毛细血管扩张症、恶性肿瘤、何杰金氏病、淋巴瘤、淋巴肉芽肿等 实验报告 实验原理 实验方法 实验结果：绘出大吞噬、小吞噬、E花环、转化后的淋巴细胞镜下图 思考题：免疫细胞功能测定的意义有哪些? 病原生物学与免疫学教研室 sqjcbwm@163.com Tel:03733831083 第三讲: 免疫细胞功能测定 主要内容 中性粒细胞吞噬功能实验 E花环形成实验 淋巴细胞转化实验 单个核巨嗜细胞吞噬功能实验 【实验目的】 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法 通过本实验理解机体的非特异性免疫机制 【实验原理】 吞噬作用（phagocytosis）：是指细胞从周围环境摄取固体颗粒（如：微生物或较大的细胞残片）的活动 血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分 【实验原理】 吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细胞（neutrophil）和单核吞噬细胞（mononuclear phagocyte）两类 大吞噬细胞 吞噬细胞的分类 小吞噬细胞 大吞噬细胞 来源： 单核巨噬细胞 存在部位： 血液（单核细胞)、全身结缔组织及小血管的基底膜组织（巨噬细胞） 功能基础： 富含溶酶体及线粒体 功能： 吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞 反应时间及寿命：反应时间长（48h），寿命长 小吞噬细胞 来 源： 血液的中性粒细胞 存在部位： 血液、炎症部位（全身） 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质 功 能：主要吞噬化脓菌 反应时间及寿命：反应时间短，数分钟到几小时，寿命短，平均数小时 吞噬过程示意图 中性粒细胞的吞噬作用 吞噬过程 【实验器材】 1、无菌肉汤，白葡菌液，PBS缓冲液，瑞氏-姬姆萨染液 2、注射器,解剖器材,玻片,显微镜等 【实验方法】 1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲形进针)无菌淀粉肉汤2ml，诱导浆液渗出 2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，轻揉腹部，让小鼠活动 3.取样：注射后30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片 4.干燥：室温或者放温箱中完全干燥标本 5.瑞氏-姬姆萨染液染色： 滴加3滴A液于标本上，以完全盖住标本为宜，染色40秒。 滴加8滴B液，用洗耳球吹出微风使液面产生涟漪，使两液充分混匀，染色5分钟。 水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。 吸水纸拍干水分，干燥。 6.油镜镜检 油镜使用镜油的原理 光线丢失 光线保留 油镜的使用方法 低倍镜找到视野后，下降载物台，滴加香柏油，调节物镜使用油镜镜头，从侧面观察，用“粗调节器”上升载物台至物镜镜头浸入油内（有些镜头可以伸缩）；从目镜观察，用粗调节器下降载物台，在此过程中可能会有比较清晰的视野一闪而过，此时，立即停止并调节“细调节器”倒回，调整后就可以看到比较清晰的视野 前后左右调节载物台，寻找满意视野 下降载物台，去载玻片，用擦镜纸和擦镜液擦油镜镜头 油镜找视野 油镜找细胞 收显微镜 低倍镜找