第九章细胞的骨架体系.pptVIP

第十章 细胞骨架 赖晓芳 第一节 细胞骨架概述 细胞骨架：cytoskeleton，是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 1924年，在光学显微镜下发现了应力纤维 1928年，Klotzoff提出了细胞骨架的原始概念 1963年，采用戊二醛常温固定在细胞中发现微管 60年代后期，开始了细胞骨架的认识 细胞骨架的特点：弥散性、整体性、变动性 狭义的细胞骨架：细胞质骨架（微丝、微管、中等纤维） 广义的细胞骨架：细胞质骨架、细胞核骨架、细胞膜骨架、细胞外基质 细胞骨架 细胞骨架的功能 作为动态支架，提供结构支撑，决定细胞形状，抵抗细胞变形 作为细胞内一种框架结构，定位细胞器，从而决定细胞的极性 作为细胞内的高速公路网，指导物质和细胞器在细胞内的运动 作为细胞的产力装置，使细胞的迁移行为得以完成 作为细胞有丝分裂装置的必需组分，参与细胞分裂的完成 作为锚定mRNA并促进其翻译成多肽的位点 作为信号转导的成分，参与信号转导 细胞骨架的研究方法 荧光显微术--观察细胞骨架及骨架的动态变化 将小分子荧光染料与细胞骨架结构的蛋白质亚基共价偶联 目的蛋白与荧光蛋白基因构建到同一个表达载体上 利用录像显微术和聚焦激光束的离体运动分析 基因工程细胞的应用 基因敲除 第二节 微管 微管：microtubule，是存在于真核细胞中由微管蛋白装配成的长管状细胞器结构，平均外径为24nm，内径15nm，通过其亚单位的装配和去装配能改变其长度。 微管在胞质中形成网络结构，作为运输路轨并起支撑作用。对低温、高压、秋水仙素等药物敏感。 细胞内微管呈网状或束状分布，并能与其他蛋白共同装配成纺锤体、基粒、中心粒、鞭毛、纤毛、轴突、神经管等结构，参与细胞形态的维持、细胞运动、细胞分裂。 微管 一、微管的成分、结构及存在形式 由α和β两种微管蛋白亚基二聚体为基本单位装配而成 微管壁一周有13个αβ二聚体盘绕成 1、微管的成分和结构 微管是由13 条原纤维构成的中空管状结构， 直径22~25nm。 每一条原纤维由微管蛋白二聚体线性排列而成 微管蛋白二聚体由结构相似的α和β球蛋白构成。 α球蛋白结合的GTP从不发生水解或交换。 β球蛋白也是一种G蛋白，结合的GTP可发生水解，结合的GDP可交换为GTP。 微管的结构和组成 2、微管的存在形式 微管可装配面单管、二联管（鞭毛、纤毛）、三联管（中心粒、基体） 单管：singlet，可随细胞周期发生变化，在低温、Ca2+和秋水仙素作用下容易解聚，属于不稳定微管，如纺锤体 二联管和三联管只存在于某些特定的细胞器中，对低温、Ca2+和秋水仙素不敏感，属于稳定微管 二、微管的装配 1、体外装配方式---分为3个时期：成核期、延长期、稳定期 成核期 α-微管蛋白和β-微管蛋白形成αβ二聚体，αβ二聚体先形成环状核心(ring)，经过侧面增加二聚体而扩展为片状螺旋带，αβ二聚体平行于长轴重复排列形成原纤维(protofilament)。当螺旋带加宽至13根原纤维时，即合拢形成一段微管。 延长期 细胞内高浓度的游离微管蛋白使微管聚合速度习快于解聚速度，新的二聚体不断加到微管的端点使之延长。 稳定期 随着细胞质中游离微管蛋白浓度的下降，达到临界浓度时，微管的聚合与解聚速度达到平衡，微管长度相对恒定。 所有的微管都有确定的极性。 （-）αβ →αβ→ αβ（+） 细胞内由微管构成的亚细胞结构也是有极性的。 微管的加上和释放主要发生在（+）极，延长主要依靠在（+）极装配GTP微管蛋白 低温、高的钙浓度使装配平衡趋向于解聚，另外微管蛋白浓度、最适pH及能量也影响 2、体内装配方式 装配和去装配在时间和空间上是高度有序的，间期，相对平衡；分裂期，受细胞周期的控制，前期胞质微管去装配，再装配成纺锤体，末期逆向转变。 3、微管装配的动态调节机制 动态调节机制：踏车模型和非稳态动力学模型 踏车模型：微管结构具有极性，（+）极的最外端是β，（-）极的最外端是α，二者添加异二聚体的能力不同。初期，游离的微管蛋白二聚体浓度高，在（+）极的添加速度高于（-）极，微管趋于延长，随着游离的微管蛋白二聚体浓度的下降， （+）极的添加速度与（-）极的解聚速度达到平衡，微管长度相对恒定。 非稳态动力学模型： 动力学不稳定性产生的原因： 微管两端具GTP帽(取决于微管蛋白浓度)，微管将继续组装，反之，形成GDP帽则解聚。 三、微管结合蛋白（MAP） 四、特异性药物 秋水仙素：colchicine，阻断微管蛋白装配成微管，可破坏纺锤体结构。在二聚体上有其结合位点，改变或封闭微管蛋白。与鬼臼素竞争 长春花碱：作用同上，但结合位点不同。与美登木竞争 紫杉酚：taxol，促进微管装配，并使已形成的微管稳定。但其稳定作用对细胞是有害的，使细胞停止于有丝分裂期。 五、