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第五讲 细胞骨架及细胞运动 北京大学医学部 基础医学院 细胞生物学系 刘羿男 第五讲 细胞骨架及细胞运动 第一节 微管系统 第二节 微丝系统 第三节 中等纤维 第四节 马达蛋白 第五节 细胞运动 概 述 细胞骨架的概念： 是指真核细胞中由蛋白纤维构成的网架结构体系，主要组成：微管(Microtubule, MT)、微丝(Microfilament, MF)和中等纤维(Intermediate filament, IF)以及功能各异的结合蛋白质组成。 细胞骨架的功能: 维持细胞形态；保持细胞内部结构的有序性；参与细胞运动、细胞内物质运输、细胞分裂、信息转导等生命活动。 概 述 概 述 广义的细胞骨架：包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质，形成贯穿于细胞核、细胞质、细胞外的一体化网络结构。 狭义的细胞骨架：仅指细胞质骨架，它们均由单体蛋白构成纤维型多聚体，很容易进行组装和去组装。主要包括微管、微丝和中等纤维。 概 述 细胞骨架常用的研究方法 电镜技术：超高压电镜、扫描电镜等显示细胞骨架的各种细丝的立体图像； 酶消化技术：选择地抽取细胞骨架的成分； 免疫荧光显微技术：对细胞骨架研究起到推动作用。 第一节 微管(Microtubules) 一、微管的结构组成与极性 二、微管的组装和去组装 三、微管组织中心 四、微管结合蛋白 五、微管的功能 六、药物对微管的影响 一、微管的结构组成与极性 微管的结构组成： 是真核细胞中重要的细胞骨架成分。有稳定的MT和不稳定的MT之分。 形态上呈中空的管状结构，其外径为24nm，内径为15nm。 长度变化很大。 在多数细胞中呈放射状分布。 一、微管的结构组成与极性 微管是由微管蛋白亚基组装而成。 ?、?-微管蛋白结合而成的异二聚体。 ??-异二聚体是细胞内游离态微管蛋白的主要存在形式，也是微管组装的基本结构单位。 ??-异二聚体 ?-微管蛋白：含有一个GTP结合位点，但该位点的GTP通常不发生水解，因而被称为不可交换位点 (nonexchangable site, N-site)。 ?-微管蛋白：也含有一个GTP结合位点，该GTP在微管蛋白二聚体参与组装成微管后，可水解为GDP。当微管去组装后，?-微管蛋白上的GDP可以被细胞质中的GTP所替换，然后再参与微管的组装。故该GTP的结合位点被称为可交换位点(exchangeable site, E-site)。 此外，微管蛋白上还有二价阳离子结合位点，一个秋水仙素结合位点，一个长春碱结合位点。 一、微管的结构组成与极性 ??-异二聚体头尾相接, 形成细长的原纤维(protofilament), 13根原纤维纵向排列组成微管的壁。 一、微管的结构组成与极性 一、微管的结构组成与极性 结构上的不对称导致微管组装时，??-异二聚体在两端的聚合速度明显不同。 通常将组装快的一端称为正极(plus end)，而另一端称为负极(minus end)。 ?-微管蛋白朝向正极。 一、微管的结构组成与极性 典型的微管正极朝向外围，而负极锚定在微管组织中心。 一、微管的结构组成与极性 3. 微管的类型：从结构上看，微管有三种类型： 不稳定并随着细胞周期各个时相而发生变化 常温条件下MT聚合，低于4?C MT解聚； 秋水仙素、长春碱阻止MT聚合； 有丝分裂期：MT形成纺锤体，子细胞出现纺锤体消失。 最稳定；由9组三联体微管组成，每组微管斜向排列，略似风车的旋翼。如中心体。 中心体由两个互相垂直的中心粒和周围基质(中心球)组成。中心体具有确定细胞分裂极的作用。 第一节 微管(Microtubules) 一、微管的结构组成与极性 二、微管的组装和去组装 三、微管组织中心 四、微管结合蛋白 五、微管的功能 六、药物对微管的影响 二、微管的组装和去组装 微管的体外组装：分为成核和延伸两个阶段。 一些微管蛋白二聚体首先纵向聚合形成短的丝状结构，即成核反应； 然后在两端以及侧面增加二聚体而扩展成片状； 当片状聚合物加宽到13根原纤维时，即合拢成为一段微管。 新的微管蛋白二聚体不断组装到这段微管的两端，使之延长。 二、微管的组装和去组装 二、微管的组装和去组装 微管的组装与其底物(携带GTP的??-异二聚体)的浓度有关：底物浓度较高时，在微管的末端组装速度快，使微管延长； 当二聚体结合到微管末端后，?-微管蛋白上的GTP会水解成GDP。GDP形式微管蛋白与微管的末端亲和性较小，容易从其末端脱落而使微管解聚。 通常?微管蛋白的负极端组装速度较慢，而?-微管蛋白的正极端组装较快。 二、微管的组装和去组装 GTP-帽(GTP-cap)： 当组装体系中结合GTP的??-异二聚体浓度高时，微管的组装速度大于微管末端GTP水解速度，可以在微管的末端形成一段结合GTP