山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备.pdfVIP

， ， （ ）： ２０ １ ４ ３ ５ １ １ ２ ９３４ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 山羊ＩＦＮ 基因的克隆表达与多克隆抗体制备 γ 安 贝，赵玄多，杨雯昱，侯伟杰，高 洋，陈德坤! 　 　 （西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 ７ １ ２ １ ００） 摘 要：为获得山羊ＩＦＮ 重组蛋白，提取山羊外周血淋巴细胞总 ＲＮＡ ，反转录得到 ｃＤＮＡ ，以此为模 　　 　 γ 板经ＰＣＲ 扩增获得ＩＦＮ 的ＯＲＦ 区，构建重组克隆载体。经ＰＣＲ 扩增得到编码山羊ＩＦＮ 成熟肽的基因 γ γ 序列，连入重组表达载体 ，转入 （ ）感受态细胞中，测序并分析。重组表达载体经 ｐＥＴ３２ａ ＢＬ２ １ Ｃｏｄｏｎ Ｐｌｕｓ ＩＰＴＧ 诱导后，对产物进行ＳＤＳＰＡＧＥ 分析，并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果 显示，编码山羊 成熟肽部分的片段长 ； 分析显示，融合蛋白大小约为 ，在 ＩＦＮ ４３２ ｂ ＳＤＳＰＡＧＥ ３４．９ ｋｕ γ ｐ 条件下，以 ／ 的 诱导 ，可得到大量可溶性表达的目的蛋白；间接 测定制得 ３０ ℃ ０．３ ｍｍｏｌ Ｌ ＩＰＴＧ ６ ｈ ＥＬＩＳＡ 的多克隆抗体效价为１ ∶１ ０６ 。 关键词：山羊； ；基因克隆；原核表达；抗体制备 ＩＦＮ 　　 γ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５ ２ ．４ Ａ １ ００７５０３８ ２０ １ ４ １ １００２ ９０６ 近年来，我国养殖业发展迅速，但羊痘、羊口疮、 ５ ０００ 、限制性内切酶 、 、 均购 　　 ＥｃｏＲＩ Ｂａｍ Ｈ Ⅰ Ｈｉｎｄ Ⅲ 羊传染性胸膜肺炎及奶山羊乳房炎等疾病对羊群的 自宝生物（大连）有限公司； 购 Ｔｒａｎｓ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ Ⅰ ［ ］ １４ 危害仍然很严重 。 目前，对于这些细菌性疾病的 自北京全式金生物公司； ＰａｇｅＲｕｌｅｒ Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ Ｐｒｏ 防治多采用抗生素，但抗生素的使用不但造成耐药 ｔｅｉｎ Ｌａｄｄｅｒ 购自 公司； （ ）试 Ｔｈｅｒｍｏ Ｔｒｉｚｏｌ Ｔａｋａｒａ 剂、 反转录试剂盒购自宝