DNA测序常见问题分析及解决办法zcw.pptVIP

中美泰和生物技术（北京）有限公司 主讲人：朱传伟 一、染料峰 辨识要点：一般染料峰出现在200bp以内，图谱被抬高，对测序结果的判读有一定影响，此区域的QV值一般比较低。测序信号偏低时，染料峰比较容易出现。 原 因：纯化实验时，染料去除不彻底。 解决方法：重新安排测序反应 二、酒精峰 辨识要点：酒精峰一般出现在200-300bp之间，基本上不影 响测序结果的判读，但此区域的QV值一般偏低。 三、双克隆引起的套峰 辨识要点：左边清晰干净，右边全部双峰；raw data中左边峰高比右边高一倍。但对于部分样品，也可能只是序列中一段出现双峰，两边序列是好的。 原 因：挑克隆时两个质粒混在一起；两个质粒使用同样的载体。如果是一个质粒中混有少量同样载体的 其他质粒，则峰图类似于“4 Repeats 图A”。 解决方法：重新挑单克隆，重新提取质粒 四、杂合子引起的套峰 辨识要点：左边清晰干净，右边全部双峰，且双峰处两种碱基的峰高基本一致，如图A；反向测序结果如图B，也是左边清晰干净，右边全部双峰；而同批次其他PCR的测序结果，峰图干净无双峰现象，如图C。 原 因： ① 通过图A与图B、或与图C的峰图序列进行比对，可以发现图A为杂合子，一套染色体正常，另一套染色体DNA在87bp的位置缺失一个碱基A（而在图B中为在