弗氏链霉菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆及表达.pdfVIP

维普资讯 21卷 5期 生 物 工 程 学 报 Vo1．2l No．5 2005年 9月 ChineseJournalofBiotechnology September 2005 弗氏链霉菌丝氨酸蛋 白酶基 因的克隆及表达 Gene Cloning and Expression of Serine Protease SFP2 from Streptomycesfradiaevar．kll 李 江 ，石鹏君 ，张王照 ，韩晓宇 ，徐玲玲 ，张会图 ，姚 斌 ，范云六 LIJiang，，。，SHIPeng—Jun ，ZHANGWang—Zhao ，HANXiao—Yu。，XULing—Ling。，ZHANGHui—Tu ， YAO Bin andFAN Yan-Liu 1．中国农业科学院生物技术研究所 ，北 京 100081 2．中国农业科学院饲料研究所 ，北 京 100081 3．东华理工学 院生物系 ，江西抚州 344000 1．BiotechnologyResearchInstitute，ChineseAcadem)ofAgriculturalSciences，Bejiing100081，China 2．FeedResearchInstitute．ChineseAcademyofAgricultural sc，lc ．Beijing100081．China 3．DepartmentofBiology，EastChina Instituteof Technology，FuzhouJiangxi344000，China 摘 要 从一株具有极强 的降解羽毛 能力的弗氏链霉菌菌株 (Streptomycesfradiaevar．kl1)中纯化得到 了一种丝氨酸蛋 白酶 SFP2 经蛋 白测序 ，得 到部 分氨 基酸序列 ，设计 简并 引物 ，PCR扩增得到部分基 因序列 ，通过 构建基 因文库 ，获得 了包括信 号肽 序 列在 内的完整 的基 因 2(EMBI收录号 AJ784940)，开放 阅读框全长 924bp，包括 114bp的信号肽编码序列和 810bp的酶原编 码序 列，其 中成熟蛋白编码基 因长 576bp，编码 191个氨基 酸，理论分子量为 19．112kD。酶原编码基 因和 成熟蛋 白编码基 因均 在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中得到 了表达 ，酶原编码基 因表达产物具有正常的生物学活性 ，证 明了克隆基 因的生物学功能。 关键词 弗氏链霉菌，丝氨酸蛋 白酶 ，基 因克隆，表达 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1000．3061(2005)05．0782．07 Abstract ExtracellularserineproteaseSFP2from Streptomycesfradiaevar．kl1withhighfeather-degradingactivitywas purified．Thepartialaminoacidsequencesofinternalpeptideofpurified SFP2weredetermined，and thepartialgeneencoding SFP2wasclonedbyPCR usingthedegenerateprimersdesignedaccordingtotheaminoacidsequences．Complete 2genewas clonedbyscreeningthegenomicDNAlibraryofStreptomycesfradiaevar．kl1．TheOpenReadingFrameof 2includingpre． pro—enzymeis924bp long (EMBIAccessionnumber：AJ784940)．Thesignalpeptidesequenceisaslongas114bp．the precursorsequenceis810bpandthematureenzymeis576bplong，encoding191aminoacidresideswiththeputativemolecular weightof19．112kD ．In E ．coliand Bacillussubtilis，thetwosequencese