猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查.pdfVIP

第34卷 第8期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．No．8 2012 年 8 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Aug． 2012 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．08．10 猪博卡病毒 PCR检测方法的建立及其初步流行病学调查 胡军勇 ，张 倩 2,3，王丹丹 ，涂志勤 ，胡睿铭 z，汤细彪 z，吴 斌 ： (1．华中农业大学 动物科技学院，湖北 武汉 430070；2．华中农业大学 动物传染病诊断中心 ，湖北 武汉 430070； 3．农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉 430070) 摘 要：猪博卡病毒(PBoV)是一种新出现的病毒，可以导致仔猪急性腹泻。为建立该病毒的检测方法，本实 验根据 PBoV的NS1基 因序列设计一对 引物 ，建立 了PCR检测方法。特异性试验结果表明，该方法能够从 PBoV 阳性样品中特异性的扩增出482bp的片段，而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、沙门 氏菌、大肠杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌的核酸样品均无非特异性扩增反应。敏感性试验显示 ，该PCR方法 对 PBoV 的最低检测量为213．6拷 贝。此外 ，应用该方法对湖北、湖南、河南省的各大猪场进行 了流行病学调查 ． 在 79个规模化猪场采集的248份病料样品中有 172份样品为PBoV阳性。其中，对4个发生腹泻疫情的规模化 猪场进行了分群抽样调查，结果显示PBoV在腹泻猪群中的阳性率达到 73．95％，并显著高于非腹泻猪群(47．83％1。 本研究调查结果显示 PBoV在 国内猪群 中流行广泛而且感染率高。 关键词：猪博卡病毒；PCR检测方法；腹泻；流行病学调查 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2012)08。0632．05 EstablishmentofthePCRassayforporcineBocavirusdetection andprimaryepidemiologysurveyofthevirusinfection HUJun—yong，ZHANGQian。，w_ANGDan—dan，TUZhi—qin，HURui—ming2，TANGxi—biao，WUBin， (1．CollegeofAnimalSciences Technology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China； 2．DiagnosticCenterforAn imalDiseases，HuazhongAgriculutralUniversity，Wuhan430070，China； 3．StateKeyLaboratoryofAgriculutralMicrobioloyg，Wuhan430070，China) Abstract：PorcineBocavirus(PBoV)isnewlyemergedinChinawhichissupposedtobeassociatedwiththecauseofdiarrhea inpiglets．ToestablishtheassayforPBoV detection，aPCR protocolwasdevelopedwithapairofprimersdesignedaccordingto NS1gene available in GenBank．Undertheoptimized conditionsofthePCR reaction，thespecificrfagmentof482 bp was amplifiedfrom thePBoV NS1genecontainingrecombinantplasmidwith alimitdetection equivalentto 213．6 copies，butno amplificationswere