党参多糖含量和组成分析及对质粒DNA的保护作用与研究.pdfVIP

党参多糖含量和组成分析 及其对质粒DNA的保护作用研究 陈克克 摘要：党参是我国传统名贵中药材，《中华人民共和国药典》2005版收载的 党参Codonopsispilosula Oliv．的干燥根，具有补中益气，健脾益肺之功效。主治脾肺虚弱，气短心 tangshen 悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等症。凤党，是主产于陕西风县的道地党参 药材，商品名称西党，是素花党参Cpilosula之一种，素以质量优疗效佳著称，久 为医家珍贵药材。现代药理实验表明党参多糖是党参的主要有效成分之一，具有 调节机体免疫、清除自由基、造血和抗衰老等作用，所以备受人们关注。本文从 以下三个方面对凤党进行了研究。 1．分别利用苯酚一浓硫酸法和称重法测定了不同生长年限风党的多糖含量和 醇溶性浸出物含量，同时结合实际生产过程中凤党产量情况，确定采收三年生风 党为宜。进一步对不同采收时期三年生凤党的多糖含量和醇溶性浸出物含量进行 测定，结果表明，10月下旬采收的三年生凤党的多糖含量和醇溶性浸出物含量最 高，分别为28．09％3}[157．56％。综合考虑凤党多糖含量、醇溶性浸出物含量以及实 际生产情况，确定风党的最佳采收期为生长第三年的10月下旬至11月上旬，从 而为风党的GAP研究提供了科学依据。 2．采用水提醇沉法提取凤党的水溶性多糖，三氟乙酸(TFA)法水解多糖成单 糖，使用真空冷冻干燥机冻干水解液后，以1．苯基．3．甲基．5．吡唑啉酮(PMP)作为 衍生化试剂进行水解样的柱前衍生化反应，然后采用高效液相色谱法，分别以乙 酸铵和磷酸盐作为流动相，优化色谱条件，对党参多糖样品中的单糖组成进行定 性、定量分析，并将此方法进一步应用于秦艽多糖和绞股蓝多糖的分析。结果表 min-÷40min_50min_80 min，溶剂B 时，分离效果较好。(2)以乙酸铵为流动相，在最佳实验条件下分离9种单糖标准 品时，仅出现8个峰，即只能使8种单糖标准品达到完全分离，经与磷酸盐流动 相相比较，发现木糖和阿拉伯糖未能分开，重合为1个峰。(3)以磷酸盐为流动相， 通过调节pH值和梯度洗脱条件，结果发现，在pH值为6．9，梯度洗脱条件为时 间0min,5 min，溶剂B min一10min一60 10％一11．6％一14％一20％时是最佳 的实验条件。(4)以磷酸盐为流动相，在最佳实验条件下分离9种单糖标准品，结 果分离出9个峰，其中半乳糖、木糖和阿拉伯糖未能完全分开，但与乙酸铵流动 相比较，分离效果更好。(5)以磷酸盐为流动相，在最佳实验条件下分析党参多糖 的单糖样品，结果发现，党参多糖样品含有6种单糖，分别是甘露糖、鼠李糖、 半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其摩尔比为O．07：0．22：1．00：4．38： 0．8l：1．40。(6)以磷酸盐为流动相，在最佳实验条件下分别分析秦艽多糖和绞股蓝 多糖的单糖样品，结果显示，秦艽多糖含有7种单糖，分别是甘露糖、鼠李糖、 葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其摩尔比为O．06：O．25 糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖，其摩尔比为 糖和绞股蓝多糖的单糖组成和含量，发现不同中药多糖的单糖种类和含量均不相 同，各有其特征。 3．探讨了不同浓度多糖样品溶液对H202光解反应诱导质粒DNA损伤的保护 作用，结果显示：(1)在O．1mg／mL到0．4mg／mL范围内，党参多糖随着溶液浓度 的增大，对DNA损伤的保护作用先增大后减小，并在浓度为0．3 mg／mL时保护效 果达到最好，与芦丁相比，两者保护作用相当。(2)在0．1mg／mL到3．0 medrnL范 围内，秦艽多糖对DNA损伤保护作用的电泳条带基本呈现弥散现象，保护效果不 理想。(3)在O．1mg／mL到3．0mg／mL范围内，绞股蓝多糖对DNA损伤的保护效果 呈现浓度依赖关系，即随浓度的增大保护效果增强，在3．0