全脑缺血再注大鼠海马Fas凋亡通路激活及HWTX-Ⅰ干预研究.pdfVIP

摘要 目的：通过观察HWTX．I大鼠蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损 伤在体动物模型海马CAl区锥体细胞及胞内线粒体形态结构变化、 Fas凋亡通路相关因子核酸及蛋白表达的影响，探讨HWTX-I与由Fas 分子启动的死亡信号转导通路之间的关系，确定其在以上模型中神经 保护有效性和可能分子机制，为开发一种新型神经保护作用药物提供 理论和实验依据。 研究方法：成年雄性SD大鼠48只，随机分为3组，即假手术组、 于光镜观察海马CAl区Nissl染色锥体细胞显微形态结构变化，电镜 观察海马CAl区锥体细胞超微形态结构变化和免疫组化技术检测海 马CAl区Fas凋亡通路相关因子蛋白表达变化；另8只用于PCR技 术检测海马Fas凋亡通路相关因子mRNA转录水平变化；除假手术 组大鼠外，非用药组和用药组大鼠都以“四血管闭塞法”构建全脑缺 血再灌流损伤在体动物模型并结合蛛网膜下腔置管术。 研究结果： 1．光镜观察：在假手术组中，清晰可见数层锥体细胞排列整齐紧密； 在非用药组中，锥体细胞排列散乱，分布稀疏，层次不完整；在用药 组中，锥体细胞略呈疏散分布状态。 2．电镜观察：在假手术组中，锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见其出 现断裂现象；在非用药组中，锥体细胞线粒体嵴模糊不清，出现线粒 体嵴断裂和线粒体空泡化现象；在用药组中，锥体细胞线粒体嵴未出 现明显断裂现象。 及Caspase一8蛋白表达；在用药组中，阳性细胞分布明显较非用药组 少而稀疏。 阳性单位均值以非用药组为最高，其次是用药组，而假手术组最低； 非用药组、用药组Fas蛋白表达与假手术组比较，差异具有非常显著 性意义(P0．01)，用药组与非用药组比较差异具有显著性意义 (PO．05)；非用药组FasL蛋白表达与假手术组比较，差异具有非常 显著性意义(Po．01)，用药组与假手术组比较，差异具有显著性意 义(Po．05)；非用药组、用药组FADD蛋白表达与假手术组比较， 差异具有非常显著性意义(P0．01，用药组与非用药组比较差异具 ． 假手术组比较，差异具有非常显著性意义(Po．01)，用药组与非用 低全缺血再灌注大鼠海马CAl区锥体细胞Fas调亡通路相关因子蛋 白表达水平作用。 mRNA 表达量与假手术组比较，差异都具有非常显著性意义(PO．01)；非 用药组Caspase．8表达量与假手术组比较。差异具有显著性意义 mRNA表达 与非用药组比较差异都具有显著性意义(P0．05)；用药组FADD mRNA表达与非用药组比较，差异具有非常显著性意义(PO．01)： HWTX．I具有较明显降低全脑缺血再灌注大鼠海马细胞Fas调亡通路 相关因子核酸表达水平作用。 结论： 1．HWTX．I蛛网膜下腔用药具有稳定全脑缺血再灌注损伤SD大鼠海 马CAl区锥体细胞及其胞内线粒体形态结构的作用。 2．HWTX．I蛛网膜下腔用药对全脑缺血再灌注损伤SD大鼠海马神经 组织保护可能通过抑制Fas分子启动的死亡信号转导通路而发挥作 用。 3．HWTX-I对大鼠海马神经细胞在体外缺血缺氧培养时，钙离子通道 和形态机能影响及神经保护量效关系、时效关系、分子机制有待进一 步深入研究。 再灌注损伤；海马；Fas(APO．1或CD95) n ABSTRACT on observetheeffectsofHWTX—I Objective：To nissl CAl neuronsof of changes staininghippocampuspyramidal ischemia rats cerebral