米根霉富马酸高产菌株选育和发酵条件优化.pdf

摘要 富马酸(Fumaricacid)作为一种重要的有机基本化工原料和大宗化工产品， 广泛应用于涂料、树脂、医药、增塑剂、食品添加剂等领域，具有重要的市场价 值。目前工业上制备富马酸主要以顺酐异构法为主。与其相比，生物法具有原料 可持续供应、操作条件温和、环境污染小等优势。随着生物技术的不断进步和化 石资源的日益耗尽，生物法合成富马酸成为化工行业可持续发展的必然选择。米 根霉(融拓印淞D垆口2)是常用的富马酸生产菌，本文在诱变得到一株高产富马 酸的米根霉的基础上，对其种子培养和发酵产酸的方法进行了探索和优化，建立 了一套系统有效的发酵路线，为以后富马酸的工业化生产奠定了扎实的基础。论 文主要工作如下： 1．米根霉富马酸高产菌株的诱变育种 根据代谢调控育种原理，设计了溴甲酚绿与丙烯醇平板的双初筛标准，建立 了一种富马酸高产菌株的诱变筛选方法。首先，根据致死率、突变率以及筛选结 果，确定了紫外、化学诱变的最佳诱变条件分别为：紫外诱变时间1miIl，诱变 孢子液稀释lOO倍。在优化条件下，通过紫外和化学的复合诱变获得了一株产量 高23％，连续传代5次后，产量无明显降低，具有较高稳定性，其副产物乙醇浓 度只有1．879／L，明显低于原始菌株。 2．米根霉在5L发酵罐的种子培养和形态控制 在5L发酵罐水平上对该突变株的种子培养和形态控制进行了研究，确定了 形成菌球的较佳条件为：控制米根霉在发酵罐内的孢子浓度在5×104．8．3×104／mI 龄的经验值，判断最佳种龄为52h。为进一步减少种子培养时间，采用双阶段调 短至44h，此时可以获得表面光滑结实的球状菌体(直径在lmm左右)。利用该 菌球进行发酵，富马酸产量达到47．39／L，转化率59．1％。 3．米根霉发酵制备富马酸的条件优化 对发酵产酸过程的条件和培养基组成进行了优化，首先确定基础的发酵条件 尿素的最佳浓度为葡萄糖1359，L、尿素O．069／L；针对培养基中的金属离子，采 用Plackett．Bum锄实验结合响应曲面的方法筛选并优化了重要的金属离子浓度 为：KH2P04 0．1 1．89／L、MgS04‘7H201．09／L、ZnS04·7H20579／L、FeS04·7H20 酸、乳酸对发酵过程的影响，确定外源添加O．59，L乳酸和0．59／L苹果酸，提高 富马酸产量的同时能够抑制副产物的生成。最终富马酸产量达到90．59／L，转化 率67％，生产速率O．98趴1．h)。 关键词：富马酸米根霉诱变菌球优化 n ABsTRAcT Fumaric acid，Viewed勰锄import锄t platfonncompound，h觞m锄ypotential i11dus仃ial me m锄ufactureof applications，such弱i11 s”theticresins，biode伊adable i11temediatefor poIymers锄d弱tlle chemical锄d microbial biologicalsyntIlesis．The fe砷entationroute mm撕c扯id to receivesmore锄dmorea_ttentiondueto produce the me chemical metIlodsaretllreatenedtlle reali够thatpetroleum-b雒ed by energy 锄d明V的IⅡnental