ANKIB1单克隆抗体的制备及应用.pdf

ANKIBI 7 7~45 ~ 杨子善等 单克隆抗体的制备及应用 第 期 doi:I0.3969/j.issn.I000-484X.20I3.07.0I8 ANKIBl 单克 隆抗体的制备及应用! 杨子善 谢云飞 解博红② 任太芳③ 王永淑③ 丰慧根 刘世饶 马振玲 ! 新乡医学院生命科学技术 学院河甫省$ 遗传性疾病牟分子靶向药物% 高校重点实验室培育基地 新 乡 453003# 中国图书分类号 R392.33 文献标识码 A 文章编号 l000-484X20l3#07-0745-05 $ % ANKIBI 0 PCR ANKIBI(I-480 , pGEX-5X- 摘 要 目的 制备抗人 的小鼠单克隆抗体 方法 扩增人 的编码序列 构建 ANKIBI(I-480表达载体 0 在大肠杆菌 中诱导表达 GST-ANKIBI(I-480,利用谷肌甘肽琼脂糖凝胶纯化重组蛋白 0 使用纯化 BALB/c , SP2/0 , , ELISA~Westernbiot 蛋白免疫 小 鼠 取其脾细胞与 骨髓瘤细胞融合 筛选杂交瘤细胞株 通过 和免疫沉淀实验 鉴 , ANKIBI 0 (7A9, ~ 定抗体 并检测 在哺乳动物细胞中的表达 结果 获得了一株杂交瘤 细胞株 所分泌 的抗体对人 大 鼠和小 ANKIBI 0 ANKIBI 0 ANKIBI , 鼠 均具有很高的灵敏性和特异性 在哺乳动物细胞中高表达 结论 成功制备 了抗 的单克隆抗体 ANKIBI在人 ~大 鼠和小 鼠脑 以及人胚肾细胞 293ET中均有较高水平的表达 0 $ % ANKIBI; ; ;RBR 关键词 单克隆抗体 表达 结构域 DevelopmentandapplicationofmonoclonalantibodyagainstANKIBl YANGzi-shan ,XIEYun-fei,XIEBo-hong ,RENTai-fang ,WANGYong-shu ,fENGhui-Gen ,lIUshi-Rao,MA zhen-ling.Xinxiang MedicalUni1ersity,Collegeoflifescienceand Technology,henan Culti1ating Keylaboratoryof hereditarydiseasesand MolecularTargeted drugs,Xinxiang 453003,China Abstract] Objective:TodeveiopandcharacterizemonocionaiantibodyagainsthumanANKIBI.Methods: ThecodingDNA seguenceofhumanANKIBIaaI-480wasampiifiedbyPCRandinsertedintotheprokaryoticexpressionvectorpGEX-5X-3.There- combinantpiasmidwastransformedintoE.coiiBL2I(DE3.AfterinductionwithIPTG,thefusionproteinGST-ANKIBI(I-480 was purifiedbyGiutathione-sepharose4