亚微米级免疫磁球及其在细菌分离中的应用.pdfVIP

V01．32 高等学校化学学报 No．2 2011年2月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 322～326 亚微米级免疫磁球及其在细菌分离中的应用 牛牧1，杜美红2，邓奕1”，高明远1 (1．中国科学院化学研究所，北京100190；2．北京市理化分析测试中心，北京100089) 摘要 以噩微米级的单分散磁性微球为基础，制备了表面包覆沙门氏菌抗体的免疫磁球．利用表面电位、荧 光光谱和酶联免疫(ELISA)等方法研究了抗体在磁性微球表面的吸附行为．在沙门氏菌磁分离实验中，通过 调节投料抗体的浓度，研究了免疫磁球表面抗体浓度和磁分离效率的相关性，与微米级商品化免疫磁球相 比，亚微米级的免疫磁球表现出了更高的磁分离效率． 关键词亚微米；免疫磁球；沙门氏菌；磁分离效率 中图分类号0648 文献标识码A 文章编号0251-0790(2011)02-0322-05 免疫磁性微球是指表面包覆抗体的磁性微球，可与含有相应抗原的靶物质特异性地结合．通过在 磁性复合微球表面偶联或者吸附上特定抗体，形成免疫磁性微球…．20世纪80年代，Ugelstad等旧“J 利用“激活溶胀”法成功制备了单分散的磁性微球，并在磁性微球表面连接上抗体制备出免疫磁性微 球，在细胞分离领域取得了良好的分离效果．随着以此技术为基础制备的商品化产品Dynabeads种类 的不断丰富，近年来免疫磁性微球在核酸分析、蛋白质分离和纯化以及靶向药物载体等领域都得到了 广泛应用”卅1J．此外，免疫磁球在食品卫生检测领域也得到了应用¨2’13】，利用免疫磁性分离技术不仅 大大缩短了检测时间，更有助于提高检测的灵敏度¨4．15J． 目前，商品化的免疫磁性微球粒径通常都是微米级，从理论上讲，微米级免疫磁球之间的排斥力 不足以抵消重力作用的影响，因而在体系中容易沉淀，不利于免疫识别和捕获过程，但是能够快速磁 分离的优势使得微米级免疫磁球得到了广泛应用一51．针对目前微米级免疫磁球存在的问题，如果能够 将免疫磁球的粒径减小到亚微米级，不仅有助于提高其胶体稳定性，而且随着其比表面积的增大有利 于提高反应活性，但是，磁分离过程是外加磁场克服微球之间相互斥力的过程，胶体稳定性的提高意 味着微球之间的相互排斥力增强，在一定程度上会降低微球的磁响应性．为了解决这一问题，本课题 组通过前期的研究工作¨6|，成功地制备了具有良好胶体稳定性与磁响应性的亚微米级磁性微球，并在 细菌分离的初步实验中取得了良好的分离效果ⅢJ． 本文在前期研究工作基础上¨引，对亚微米级免疫磁球的制备过程进行详细研究，进一步完善了磁 分离捕获沙门氏菌的相关工作． 1 实验部分 1．1试剂与仪器 PVP包覆Fe30。纳米粒子，粒径大小约为5．8 5 mg，Sigma—Aldrich公司)；四乙基罗丹明(RB200，283924—100 收稿日期：2010．i14)1． 联系人简介：高明远，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事无机纳米材料的制备及其生物应用研究． E—mail：gaomy@ieeas．ac．cn 万方数据 牛牧等：亚微米级免疫磁球及其在细茵分离中的应用 323 mg／mL，美国KPL公司)； 鼠IgG抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；沙门氏菌多克隆IgG抗体(1 沙门氏标准菌株(Salmonellasp．，菌株编号：1．1552，中国科学院微生物研究所)；实验过程中所用水 均为去离子水． Model 680型酶标仪(BIO—RAD公司，美国)；Cary 国)；JEM．IOOCXII透射电子显微镜(日本)． 1．2磁性微球的制备 PVP、25 参考文献[17]方法，将1．8mL苯乙烯单体、90mgVS0、300mg mL乙醇和3mL去离子 水加入到50mL三颈瓶中，在70℃条件下进行聚合反应，反应开始2h后，将PVP包覆的Fe，O。纳米 粒子的乙醇溶液分批