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利用产脂肪酶B的毕赤酵母工程菌生物拆分制备西司他丁关键手性中间体的体系优化.pdf
第 １３卷第３期 生 物 加 工 过 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ３
２０１５年５月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｙ ２０１５
－
ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０３０１３
利用产脂肪酶Ｂ 的毕赤酵母工程菌生物拆分制备
西司他丁关键手性中间体的体系优化
１ １，２ １ １
郑 磊 ，何军邀 ，黄 金 ，王 普
（１ 浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 ３１００３２；２ 浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 ３１５１００）
＋ ＋
摘 要：Ｓ （ ） ２，２ 二甲基环丙烷甲酸（Ｓ （ ） ＤＭＣＰＡ）是合成西司他丁的关键手性中间体。 构建的毕赤酵母
＋
工程菌生产的脂肪酶可高选择性催化外消旋２，２ 二甲基环丙烷甲酸乙酯（ＤＭＣＰＥ）不对称水解制备 Ｓ （ ）
ＤＭＣＰＡ。 对该工程菌产胞外脂肪酶的产酶条件及生物拆分反应条件进行优化，以提高其催化效率。 优化获得重组
毕赤酵母最佳产酶条件：采用ＢＭＭＹ培养基，培养基初始ｐＨ ８０，５００ ｍＬ摇瓶装５０ ｍＬ培养基，每隔４ ｈ 向培养基
中补加终体积分数为１％的甲醇。 培养１９２ ｈ后，发酵液中脂肪酶比酶活为４４１Ｕ／ Ｌ，较优化前提高了９０９％。 利
＋
用含脂肪酶的发酵上清液进行ＤＭＣＰＥ 的生物拆分反应，底物浓度为１５ ｍｍｏｌ／ Ｌ，３０ ℃反应３６ ｈ，Ｓ （ ） ＤＭＣＰＡ
的产率可达４３８％，ｅｅ．值为９９８％。
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关键词：西司他丁；毕赤酵母；脂肪酶；Ｓ （ ） ２，２ 二甲基环丙烷甲酸；生物拆分
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中图分类号：Ｑ８１５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０３ ００７０ ０６
Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＰｉｃｈｉａｐａｔｏｒｉｓ ｄｅｒｉｖｅｄ
ｌｉｐａｓｅ Ｂ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ
１ １，２ １ １
ＺＨＥＮＧ Ｌｅｉ ，ＨＥＪｕｎｙａｏ ，ＨＵＡＮＧＪｉｎ ，ＷＡＮＧ Ｐｕ
（１Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３２，Ｃｈｉｎａ；
２Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎｉｎｇｂｏ ３１５１００，Ｃｈｉｎａ）
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