利用转基因毕赤酵母高表达小分子药用多肽的研究.pdfVIP

利用转基因毕赤酵母高表达小分子药用多肽的研究.pdf

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第 卷 第 期 北 京 化 工 大 学 学 报 , 29 4 VoI .29 No .4 2002 年 JOURNAL OF BEIJING UNIVERSITY OF CHEMICAL TECHNOLOGY 2002 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用转基因毕赤酵母高表达小分子药用多肽的研究 闫亚军 陈劲春 (北京化工大学化学工程学院,北京 l00029 ) 摘 要:天然小肽 有明显的降血糖功效,由 个氨基酸残基组成。其编码基因由本实验室设计、合成,并重组 Gsp 59 构建成表达质粒 经电穿孔将该质粒转化为毕赤酵母 ( - + ),挑选 + s 型菌株进行重 pPIC9-Gsp . GSll5 His4 mut His mut 组蛋白胞外表达研究。表达蛋白经Tricine-SDS凝胶电泳分析确定了相对分子质量的正确性,其氨基酸测序 显示与天然多肽序列一致,并经紫外扫描分析确定了表达量为344 mg/ L 左右。 关键词:毕赤酵母;表达;重组 中图分类号: @786 1.3 方法 引 言 1.3 . 1 基因工程的一般方法 具体操作包括质粒 由于天然的Gsp 来源于稀有植物,资源有限。 的抽提、酶切、连接、转化大肠杆菌等均按《分子克隆 [] 而重组胰岛素的成功与成熟推动了基因工程技术应 l 中的方法进行。 实验指南》 用于重组药物多肽的研究。本实验报道降糖肽Gsp 1.3 .2 电穿孔转化和筛选重组子方法 见结果部 在毕赤酵母中成功的分泌表达的初步研究结果,为 分 进一步研究打下基础。 1.3 .3 目的基因诱导表达 将保存的His + muts 型 毕赤酵母 Pichia pastoris 是一种喜甲醇酵母,它 菌株,随机选取3 株作诱导表达,具体操作按Pichia [] 为一类简单的真核生物。同动植物表达系统相比, 2 Expression Kit( , ) 进行。 Invitrogen USA 它具有操作简单的优点;另外,和原核生物大肠杆菌 1.3 .4 表达蛋白的Tricine-SDS凝胶电泳 按 [] 等不一样,毕赤酵母能对要表达的多肽和蛋白质进 3 常规方法 进行。 行翻译后加工处理,如糖基化等更接近于哺乳动物 1.3 .5 表达蛋白量的测定 用染料结合法测定表 细胞,而目前应用较为广泛的酿酒酵母会出现过度 达蛋白的量,

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