可降解海藻酸钠-壳聚糖支架用于细胞黏附生长的研究.pdfVIP

李晓霞等。可降解海藻酸钠一壳聚糖支架用于细胞黏附生长的研究 可降解海藻酸钠一壳聚糖支架用于细胞黏附生长的研究’ 李晓霞1一，于炜婷1’2，郭昕1，张 英1，李双月1’2，马小军1 (1．中国科学院大连化学物理研究所生物医用材料工程组，辽宁大连116023I 2．中国科学院研究生院，北京100049) 摘要： 通过调节海藻酸钠与壳聚糖的比例制备了 报道非常少。 具有不同降解速度的组织工程支架，并以HepG2为细 研究的目的在于通过调控支架中海藻酸钠与壳聚 胞模型考察可降解支架对细胞黏附生长的影响。研究 糖的比例，制备具有不同降解速度的支架，并以 表明：壳聚糖含量越高，支架被溶茵酶降解的速度越 HepG2为细胞模型，考察复合支架的降解速度与细胞 快，但支架在培养液中的稳定性越高；MTT结果显示 的黏附生长之间的关系，期望最终制备更利于细胞功 细胞在壳聚糖含量为100％和67％的支架中培养时活能发挥的可降解组织工程支架。 性较高，但活死染色显示细胞多以分散状态黏附在支 2材料和方法 架上，降低壳聚糖含量时细胞活性较低且多以聚集形 式存在于支架空隙内部。通过调节海藻酸钠与壳聚糖 2．1材料和仪器 的比例制备出可降解的组织工程支架，可以控制细胞 的生长速度及黏附状态，有望为细胞的生长及功能发 浙江玉环海洋制品公司)，海藻酸钠(23cp，青岛晶岩公 挥提供更适宜的环境。 关键词：海藻酸钠；壳聚糖；降解；黏附；组织工程 中图分类号：R318．08 文献标识码：A 人肝癌细胞(上海细胞库)，激光共聚焦显微镜(德国， LeicaTCS JSM-5600)。 文章编号：1001-9731(2009)07-1143-03 SP2)，扫描电镜(日本，JEOL 2．2实验方法 1 引 言 2．2．1支架的制备 海藻酸钠(sodiumalginate，Alg)是从天然褐藻中0支架(壳聚糖含量o)：将质量浓度3％的海藻酸 提取的一种聚阴离子多糖，由}伊甘露糖醛酸和a—L． 古洛糖醛酸连结而成，具有良好的生物相容性且能在 充分水洗后再次冷冻干燥。 二价离子如Ca2+等的作用下形成凝胶，广泛应用于组 33％或67％支架：将质量浓度3％的海藻酸钠水 t 1 织工程领域[1]。利用海藻酸钠支架培养干细胞、肝细 溶液和3％的壳聚糖乙酸(体积浓度1％)溶液以2 胞、成骨和软骨细胞、胰岛细胞等的过程中[2~5]，虽然或1t 细胞能保持活性并聚集生长，但过强的亲水特性使得 海藻酸钠不能与细胞发生相互作用，而对于多数细胞 水洗后再次冷冻干燥。 而言，细胞一细胞及细胞一基质的相互作用是调节细 100％支架：3％壳聚糖的乙酸溶液冷冻干燥，以 胞增殖分化及特异性表达的重要因素【6]。同时，海藻 酸钙中的Ca2+容易与环境中的单价离子发生离子交干燥。 换使得支架的强度不稳定[7]。壳聚糖(chitosan，CS)2．2．2支架的降解 是由甲壳素脱乙酰而得的另一类天然多糖，由N一乙酰 将一定质量的支架放入含有溶菌酶(o．5mg／m1) 氨基葡萄糖和氨基葡萄糖组成，具有较高的电荷密度， 能促进细胞的黏附，而且能被体内的溶菌酶等降解[8]， 改进的Shales法[”]检测降解过程中产生的还原糖。 但材料的膨胀使得其结构不稳定[口]。壳聚糖与海藻酸 2．2．3细胞在支架上的培养 钠发生静电相互作用形成聚电解质复合材料，可以提 支架经微波除菌后置于24孔板中以酒精浸泡 高支架的机械强度D03；但充分结合的海藻酸钠一壳聚糖 复合物的降解速度比却单纯壳聚糖