Rac1-siRNA表达质粒的构建及Rac1对SW480细胞单克隆形成的影响.pdfVIP

SouthMed 2010；30(6) 南方医科大学学报U Univ) ·1339· 2广州中医药大学第二附属医院放疗科，广东广州510120) Rael蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况。方法化学合成用于产生针对Rael的发卡状RNA的 寡核苷酸，各64个碱基，退火后插入线性化的pSUPER载体的Hl启动子下游。重组载体经限制性酶切和测序。把构 制Racl蛋白表达后的效果。结果限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Racl的发卡状RNA表达载 体，该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Racl蛋白的表达。体外软琼脂单克隆形成实验显示， 抑制Racl蛋白表达后，形成的单克隆数目明显减少。直径也明显缩小。结论成功构建了针对Racl的发卡状RNA表 达载体；体外软琼脂单克隆实验表明Racl蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响，说明Rael蛋白在大 肠癌的体外生长过程中具有重要作用。 关键词：Racl；RNA干扰；软琼脂单克隆形成；SW480细胞 中图分类号：Q341文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2010)06．1339-04 Effectofsmall RNA Racl on formationofSW480cells／n interferingtargetinggenecolony vitro NAN B01 Lei2，XIAO Zhen—Shul，JIANG Qing-zhenl，GAOBin91，ZHANG 1Institute Medical 51051 ofRadiation of DigestiveDiseases，NanfangHospital，SouthernUniversity,Guangzhou5，China；mepartment Affiliated ofTraditionalChinese Oncology,SecondHospitalofGuangzhou Medicine，Guangzhou510120，China University Toconstructavector small Racl andobserveits Abstract：0bjeetive expressinginterferingRNA(siRNA)againstgene soft formationofSW480 of64base for RNA Racl effecton cells讥vitro．Methods agarcolony Oligos pairshairpintargeting were andannealed．ThesiRNAconstructsfor theannealedintothe chemicallysynthesized inserting oligos Racl，producedby downstreamofHI oflinearized confirmedrestriction andDNA promoter pSUPER,Weleby digestion sequencing．The constructedRacl—siRNAWaStransfectedintoSW48