DNA免疫鸡制备IgY抗体及其应用.pdf

DNA免疫鸡制备IgY抗体及其应用 博士生 石爽 概 述 在后基因组时代，生物医学研究面临着的挑战是将基因组学发现转换成应 用基础知识、实践应用知识、临床治疗药物及其他医疗产品。每个生命机体的遗 传密码中都蕴藏着巨大的资源。基础医学研究可以使人们进一步了解生命过程， 而生物医学研究可以挖掘和开辟出疾病诊断、治疗和预防的新途径。为了充分利 用基因组学资源，有必要对生命细胞内的实际功能分子（如DNA序列编码的蛋 白质）进行识别并了解其生物学特性,而自然界本身就已经设计和创造出了识别 和分析千变万化的蛋白质的理想工具——抗体。抗体作为蛋白质组研究的有力工 具，广泛应用于基础研究和药物开发。 90年代初期，出现了DNA免疫动物制备抗体的技术。既将含有目的基因的 质粒DNA注射入动物肌肉、皮下或脾脏等部位，使得质粒上的遗传信息在动物 体内表达，诱导动物体对DNA编码的外源蛋白产生抗体。DNA免疫无须蛋白质 纯化，故速度快，实现了高通量。通过生物信息学和DNA免疫方法，基因特异 抗体可以被设计为针对所给定蛋白的任何一个特定功能结构域，基因表达功能结 构域特异性高。 通过各种DNA免疫，可于动物体内产生大量的基因特异性抗体。这些抗体 携带特定基因标识信息，是基因特异性抗体。通过这些特定抗体与人体组织或细 胞中的蛋白结合，从而进行定位和识别未知蛋白。结合多种技术（如抗体与组织 芯片技术）来识别不同生理和病理状态下、不同组织中的成千上万的未知蛋白（如 蛋白表达谱）。还可以得到基因、蛋白、细胞和疾病之间的整合及相互关联的数 据。通过本筛选过程，带有功能信息的新基因和蛋白会被发现。其中一些基因和 蛋白有可能成为有价值的药物靶点、治疗药物或诊断标记物。此技术还可以用于 治疗性抗体的制备。 DNA免疫动物制备抗体 理论上，DNA免疫可制备出针对不同抗原的特异性抗体，从而引起人们广 博士研究生开题综述 泛的兴趣。有人通过应用DNA免疫来获得针对细胞表面分子的单体和多抗。2-5 次肌肉内注射可诱导产生抗CD54和CD157 的抗体，经脾脏应用CD54编码DNA一 次免疫即可诱导出抗CD54抗体，还制备出CD54单抗，所得CD54单抗可以和转 染的COS细胞及其他细胞中表达的CD54蛋白反应。他们认为当蛋白质抗原不能 应用或难以获得时，应用蛋白质编码的cDNA进行免疫方法是可行的。 DNA 是可于大多数宿主中诱导体液和细胞免疫的免疫方法，不同的免疫途 径可产生不同程度的免疫反应，有研究证实多次肌肉内注射编码各种白细胞表面 分子DNA 质粒可以诱导特异免疫反应。经脾脏途径单剂量编码CD147 膜蛋白的 质粒DNA 免疫小鼠，即可生产特异抗体。小鼠经脾脏途径免疫产生的抗体在免 疫后6 个月仍可检测的到。 DNA免疫诱导抗原特异性免疫反应具有其他疫苗明显不同的特点。针对质 粒骨架对DNA免疫抗体反应的辅助作用进行了研究，应用rSh28GST抗原、 rSh28GST抗原加空质粒和rSh28GST编码质粒分别免疫小鼠，发现应用DNA免疫 比蛋白质免疫可以得到较长时间稳定抗体免疫反应，其原因是质粒骨架具有佐剂 作用。 DNA 免疫鸡制备IgY 抗体 鸡作为实验动物已有很多年的历史，而近年来其已经成为一种发展很快的生 产抗体的动物，其中IgY是鸡蛋黄及鸡血中的主要抗体。 应用编码荧光蛋白、新城堡病病毒（NCDV ）融合蛋白和非洲马病病毒 （AHSV ）的VP2蛋白的DNA质粒接种鸡，通过聚乙二醇方法沉淀法从鸡蛋中获 得IgY ，三种质粒方法均可于鸡蛋中获得相应的特异性多抗。本方法制备多抗除 可用来纯化得到所需的大量免疫蛋白外，还可能用于制备大量的有诊断或治疗价 值的试剂或药物。 DNA免疫鸡制备IgY抗体技术的特色在于：1.技术过程从基因到抗体再到蛋 白；2.免疫鸡产生具有很好的效价比IgY抗体。因此，这些抗体属于基因特异性 抗体，可进行多种免疫测定以筛查人体组织或细胞样本未知蛋白靶点。允许应用 高通量技术发现未知蛋白和将这些蛋白与其同源基因相连以识别基因的功能。 技术的过程：1.应用DNA 免疫方法于鸡体内产