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联科生物技术有限公司 阵发性睡眠性血红蛋白尿流式细胞仪分析[ - 1 - ] PNH 的流式细胞仪分析 阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria ，PNH）是一种获得性 造血干细胞异常，临床主要表现为骨髓丧失造血功能、血栓、慢性溶血性贫血急性发作。PNH 的发病率很低，发病原因不详，可能与再生障碍性贫血有关系。PNH的临床表现不一，疾病 进程多变，给临床的诊断治疗和疾病研究带来很多困难。最近 15年，在PNH的细胞和分子 生物学研究中取得了重要进展，定义了导致PNH异常表现的分子缺陷。而使用流式细胞仪进 行PNH诊断分型，是PNH研究的又一里程碑。 一、病因学研究 PNH 是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血。临 床表现以与睡眠有关的、间歇发作的血红蛋白尿为特征，可有全血细胞减少或反复血栓形成。 本病的基本缺陷是影响了膜蛋白结构，使红细胞对正常血清中补体特别敏感而发生溶 血。这类红细胞每一单位抗体比正常红细胞固定更多补体 C1，而每一 C1 分子又能比正常 红细胞促使更多C3b 固定于红细胞膜上。实验发现PNH 红细胞膜蛋白衰变因子缺乏，该因 子有降解C3 转化酶作用；当缺乏时，C3 转化酶趋于稳定状态，所以激活了大量C3 并转化 为C3b 。C3b 大量在膜上呈丛状聚集，使更多C5 转化，结合到膜上，最后形成膜攻击单位， 导致溶血。另外，对补体溶血高度敏感的红细胞，其胞膜表面的乙酰胆碱酯酶活性减低，降 低的程度与溶血的严重度有关。新近研究发现，PNH 红细胞表面缺乏加速衰变因子（DAF ， CD55 ）、反应溶血的膜抑制物（MIRL，CD59 ）和C8 结合蛋白（HRF ）等，使红细胞对补 体敏感而引起溶血。 Strubing早在一个世纪之前，就第一次报告了PNH，症状为溶血性贫血，伴有夜间血红 蛋白尿。50年后，Ham和Dingle证明了PNH患者的红细胞在血清酸化条件下，易发生溶血， 这就是现在普遍使用的Ham实验，用来诊断PNH。不久，又发现PNH的溶血是由于患者的红 细胞对补体敏感。进而又发现PNH患者的中性粒细胞和血小板也有异常。Dacie在 1963年 提出了 PNH是由于干细胞突变造成的获得性克隆异常的假说。后来，通过对两位患有 PNH 的妇女的异构酶葡萄糖6磷酸脱氢酶的研究，证实了这一假说。PNH红细胞中只含有一种异 构酶，而病人正常红细胞中含有两种异构酶。 1983年，PNH红细胞的生化研究表明，PNH缺乏一种被称为延迟加速因子DAF的补体调 控蛋白。这种蛋白抑制补体C3转换酶的形成，并通过 （GPI） 的锚定作用（翻译后处理步骤）固定在细胞膜上。进一步研究表明，PNH细胞缺少这种通过 GPI与细胞膜的正常连接。这意味着，GPI锚定蛋白的合成异常，是PNH的起因。PNH细胞 系的GPI合成的生化通路也异常，这种异常发生在通路的第一阶段的N-acetylglucosamine 到phosphatidylinositol的转移过程中。 1993年Miyata等发现了PHN的基因缺陷。通过对一系列复杂的补体和转染研究，证实 了PNH细胞系的 （pig-a）基因 表达了错误的GPI相关的抗原。对 pig-a基因进行序列分析，发现迄今为止，所有报导过的 PNH病人都有pig-a基因的突变。由于这种突变发生在体细胞，所以表现不一致，并且在整 个pig-a编码区域中，都有发生突变的可能。这些突变包括缺失、插入和点突变。所有的缺 失和插入部分都很小（只有一到二个），导致漂移突变，产生了无功能产物。漂移突变导致 技术支持： 电子邮件：service@ 免费电话：8008282330 8008571184 传真电话：86 512 联科生物技术有限公司 阵发性睡眠性血红蛋白尿流式细胞仪分析[ - 2 - ] 了细胞完全缺乏GPI锚蛋白（III类细胞）。另一部分突变是点突变，保留部分活性，可以 合成少部分的GPI锚蛋白。这种突变细胞表达部分GPI锚蛋白（II类细胞）。由于pig-a基