慢病毒介导HO-1基因转染对骨髓间充质干细胞体外缺血损伤保护作用实验研究.pdf

慢病毒介导HO．1基因转染对骨髓间允质干细胞体外缺血性损伤保护作用的实验研究 中文摘要 慢病毒介导HO．1基因转染对骨髓间充质干细胞体外缺 血性损伤保护作用的实验研究 中文摘要 目的：通过慢病毒介导HO-l基因转染猪骨髓问充质干细胞(MSCs)，并建立 体外模拟缺血性损伤模型，探讨HO．1基因修饰对MSCs缺血性损伤的保护作用及其 机制。从而为下一步HO．1基因修饰的MSCs移植治疗心肌缺血的研究提供实验依据。 方法：采用密度梯度离心结合贴壁法分离、培养猪MSCs，并用免疫荧光法鉴 定；用慢病毒包装系统介导的HO一1基因转染猪MSCs，通过荧光显微镜观察并绘制 及9h时的凋亡、死亡情况，并通过RT-PCR、Westernblot技术检测两组在SOD各个 时间点的HO．1mRNA及HO．1蛋白的表达情况。 结果：密度梯度离心结合贴壁法能有效分离、纯化猪MSCs，转染48小时后， 可检测到强荧光出现，免疫荧光染色显示培养的细胞CD44、CDl05表达阳性；细胞 计数并绘制生长曲线结果显示，转基因的MSCs与未转基因的MSCs生长曲线没有显 有统计学意义。RT-PCR、Westernblot结果显示：在常氧培养条件下，HO．1．MSCs 中文摘要 慢病毒介导HO．1基因转染对骨髓间充质干细胞体外缺血性损伤保护作用的实验研究 和HO．1蛋白表达均显著性增加(尸0．01)，有统计学意义。 结论： 1．根据黏附特性可成功分离、培养获得猪骨髓MSCs。 安全，且对MSCs的增殖没有明显影响。 3．本实验结果显示：HO．1基因转染及其蛋白的稳定表达可提高缺氧、缺血环境 下MSCs的生存能力，对抗体外模拟缺血性损伤引起的细胞凋亡，从而具有保护性作 用。 关键词：慢病毒；HO．1；骨髓间充质干细胞；基因转染；缺血性损伤；保护作 用 作 者：孙海军 指导教师：钱永跃 II 慢病毒介导HO．1摹因转染对骨髓间充质干细胞体外缺血性损伤保护作用的实验研究 英文摘要 The effectofHO-—1 transfectionon protective gene stemcell causedan ischemiainvitro injury by alogous Abstract To the effectofriO-1 transfectionon objectivesurveyprotective gene mesenchymal ischemiain theevidencesriO一1 caused vitro，for of stemcells(MSCs)injurybyanalogous MSCs fortreatmentof ischemia． transplantation myocardial gene—modified Methods combinedwitlladherencemethodwere Densitygradientcentrifugalization to andcultivateswineMSCs．CultivatedMSCswerecharacterized usedsegreg