绿盲蝽触角均一化全长cDNA文库构建和化学感受蛋白基因发掘的研究.pdf

符号说明 目 录 摘要…………………………………………………………………………………………………………………I ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………．Ⅲ 1前言……………………………………………………………………………………………………………………一l 1．1昆虫触角感器的结构及感受机制………………………………………………………一2 12昆虫化学感受蛋白研究进展……………………………………………………………一4 1．3昆虫化学感受蛋白的种类………………………………………………………………．5 1．4昆虫化学感受蛋白的分子结构…………………………………………………………．6 1．5昆虫化学感受蛋白表达分布情况………………………………………………………．7 1．6昆虫化学感受蛋白功能…………………………………………………………………一8 1．7立题依据…………………………………………………………………………………。9 1．8研究内容……………………………………………………………………………………．9 I 2材料与方法………………………………………………………………………………一I 2．1雌雄绿盲蝽的触角cDNA文库的构建…………………………………………………ll 2．1．1试验用昆虫……………………………………………………………………………．1l 2．1．2文库构建相关试剂、仪器以及引物序列……………………………………………．11 2．1．3雌雄绿盲蝽触角总RNA的提取……………………………………………………一11 2．1．4第二链cDNA的合成…………………………………………………………………12 2．1．5eDNA的I司收…………………………………………………………………………．13 2．1．6杂交…………………………………………………………………………………………………………．13 2．1．7DSN处理…………………………………………………………………………………………………………13 2．1．8蛋白酶K处理…………………………………………………………………………14 2．1．9 Sfi酶切……………………………………………………………………………………………………………14 cⅨ呵A………………………………………………………．．15 2．1．10按照片段大小分离ds 2．1．11ds 2．1．12噬菌体颗粒的蛋白质包装…………………………………………………………。15 2．1．13 eDNA文库库容海度检测……………………………………………………………15 2．2．14 eDNA文库的转型……………………………………………………………………16 2．1．15插入片段大小PCR检测及重组率检测……………………………………………16 2．1．16冗余度检测……………………………………………………………………………16 T 2．1．17原始eDNA文库的测序……………………………………………………………．17 2．2绿盲蝽触角cDNA文库的生物信息学的分析…………………………………………17 2．2．1文库质量评估…………………………………………………………………………．．17 2．2．2聚类分析………………………………………………………………………………17 2．2．3序列比对………………………………………………………………………………l7 7 2．2．4功能注释………………………………………………………………………………1 2．2．5绿盲蝽化学感受蛋白基因鉴定………………………………………………………18 2．2．6克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因全长序列………………………………………………18 2．2．6．1试验用虫和试剂等…………………………………………………………………一18