小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1%2bCD45%2bCD31%2b亚群向心肌样细胞分化机制的实验的研究.pdf

小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1+CD45+CD31+亚群向心肌样细胞分化机制的实验研究 中文摘要 小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1+CD45+CD31+亚群向心肌 样细胞分化机制的实验研究 中文摘要 第一部分 促心肌分化基因筛选 目的：对 SCA-1+CD45+CD31+ 、SCA-1+CD45+CD31- 、SCA-1+CD45-CD31+ 、 SCA-1+CD45-CD31- 四个亚群基因芯片结果通过 Real-timePCR 筛选出在 SCA-1+CD45+CD31+亚群表达最高的基因 方法：根据基因芯片结果筛选出在SCA-1+CD45+CD31+亚群表达量最高的基因，包 括 myl3 、Itga4 、Epor 、Rock2 、Cxadr 、设计引物。提取 SCA-1+CD45+CD31+、 SCA-1+CD45+CD31-、SCA-1+CD45-CD31+、SCA-1+CD45-CD31- 四组亚群细胞及未 分选群细胞的RNA ，逆转录成cDNA，进行Real-timePCR 检测各基因在四组亚群及 未分选群细胞中的表达量。 结果 ：经 Real-timePCR 检测，Itga4 在未分选组中表达最高、Epor 在 SCA-1+CD45-CD31+亚群中表达最高、Rock2 在SCA-1+CD45-CD31-亚群中表达最高、 Cxadr 在SCA-1+CD45-CD31-亚群中表达最高，myl3 在SCA-1+CD45+CD31+亚群中 表达最高，且与其他亚群及未分选群比较有统计学差异（P0.05 ）。 结论：myl3 在SCA-1+CD45+CD31+亚群中表达量明显高于其他三个亚群及未分选群。 myl3 为肌球蛋白轻链家族中一员，是肌小节粗肌丝的组成部分，属于碱性轻链慢肌/ 心室肌型，目前研究表明其在肌肉再生，促进肌肉收缩方面有重要作用，而目前尚未 有研究其在促进心肌分化方面的作用。 第二部分 小鼠心梗模型的建立 目的：开胸直视下结扎小鼠冠状动脉前降支，成功建立小鼠心肌梗死模型，进行体内 实验。 方法：24 只雄性C57BL/6 小鼠，体重在14-22g，分为心梗组（n=12 ），假开胸组（n=12 ）， I 中文摘要 小鼠骨髓间充质干细胞SCA-1+CD45+CD31+亚群向心肌样细胞分化机制的实验研究 常规麻醉，固定小鼠，气管切开插管，开胸，找到前降支，结扎，心梗建立成功，逐 层关胸后拔气管插管。比较结扎前后心电图，心超及组织学变化。 结果：结扎后心电图导联ST 段明显抬高，0.2mv ，术后四周心超提示心梗组EF 和 FS 值较假开胸组明显下降（P0.05 ）,左室舒张末期内径和左室收缩末期内径明显增 加（P0.05 ），心脏HE 染色证实建模成功。 结论：气管插管开胸直视下行小鼠冠状动脉前降支结扎术成功建立小鼠心梗模型。 第三部分 myl3 促进小鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的 体外研究 第一节 小鼠骨髓间充质干细胞分离、培养及鉴定 目的：从小鼠骨髓中分离出有多向分化潜能的骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells，BMSCs) 。为进一步的实验研究提供可靠的细胞。 方法：小鼠全骨髓培养。流式鉴定细胞表面抗原表达。 结果：体外培养的原代 MSCs 10～14d 达到融合，结果显示超过 90 ％小鼠骨髓间充 质干细胞性表达 CD29 （细胞整合素分子）、CD90 （粘附分子）和CD44 （粘附分子， 介导细胞对透明质酸和骨桥蛋白的粘附）；但不表达造血祖细胞表面标志 CD11b 、 CD133 。 结论：利用 MSCs 贴壁特性，在体外条件下成功分离、培养和扩增了小鼠骨髓间充 质干细胞，用于下面体内体外研究。 第二节 转染myl3-siRNA 检测心肌特异性因子表达 目的：将合成的myl3-siRNA 转染进小鼠骨髓间充质干细胞，并检测转染后的心肌特 异性因子的表达。 方法：利用li