基因芯片制作中寡核苷酸共价固定方法研究进展.pdf

维普资讯 20O2年第 22卷 有 机 化 学 V0】．22．20O2 第 l2期 ，943 950 Chin~ JoumalofOrga~cChe~stry No．12，49 3—905 · 综述与进展 · 基 因芯片制作 中寡核苷酸共价固定方法研究进展 邓成华 沈满华 赵成学 (上海交通大学化学化工学院 上海 20024o) 摘要 寡核苷酸在 固体支持物如玻璃、硅片、尼龙或塑料表面的牢固、密集 、有规律的离散 固定是基因芯片制作技术 的关键步骤 ．综述 了国内外寡核苷酸在固体支持物表面共价固定的主要方法 ． 关键词 基因芯片 ，固定化 ，寡核苷酸 CovalentInunobilizationofOligonucleotidesontoSolidSubstrates in theM anufacturingofDNA Chips DENG，Cheng-Hua SHEN，Man—Hua ZHAO，Cheng-Xue (DepclrtrnerttofChemistry， Jiaotongv,~mity，Shangha／200240) Abstract Immobilizationofoligonucleotidesontooslidsubstratesplaysna importantrolein themanufacturing ofDNA chips．Thispaperr~ ewsthe developmentin hte covalentimmobilization ofoligonucleotidesonto differentsolidsubstratesincludingglassplate，siliconwafer，nylon andohterplasticsupports． Keywords DNA chip，immobiliaztion，oligonucleotide 基因芯片制作中寡核苷酸的固定就是按特定 固定已成为固定方法研究的主要趋 向，可选择经过 顺序离散、密集地将成千上万个寡核苷酸探针或基 适当处理的玻璃片、硅片、硝基纤维素、尼龙膜 、聚丙 因片 断 固定在 玻璃、硅 片、尼龙 或塑料 片等表 烯膜等作为芯片的基片． 面 l『．样品DNA或 RNA荧光标记后与寡核苷酸探 1．1 寡核苷酸在玻璃片或硅片表面的固定 针进行杂交 ，通过激光共聚焦显微镜扫描 ，以计算机 寡核苷酸在玻片表面的固定既可以采用原位固 系统对荧光信号作 比较和检测 ，从而迅速得到所需 定法又可 以采用直接 固定法 ．采用平板照相技术L7】 的大量基因信息，与传统 的仪器检测方法相比具有 进行光固相合成 ，可以得到高密度的寡核苷酸阵列，， 高通量、微型化、自动化、成本低、防污染等特点 ．基 固定密度可达 110fmolDNA／t—m2．直接点样法是将 因芯片技术主要应用于基因序列分析、基因多态性 预先合成好的寡核苷酸固定在经表面处理的玻璃或 和变异性分析、疾病诊断和预测、药物筛选等领 硅片上 ．玻璃或硅片表面经水解形成的许多硅羟基 域 [3～61． 能与多种有机硅试剂反应 8，在表面引入活性的官 能团如氨基、巯基 、羟基和羧基等，然后通过交联试 1 寡核苷酸在 固体支持物上的固定