两种大眼蟹线粒体12S rRNA基因序列的比较研究.pdf

第28卷第12期 球 产 科 学 V01．28No．12 2009年12月 FISHERlESSCIENCE Dec．2009 2S 两种大眼蟹线粒体1 rRNA基因序列的比较研究 徐敬明 (重庆文理学院生命科学与技术学院，重庆402168) 摘要：测定了宽身大眼蟹和日本大眼蟹线粒体12SrRNA基因部分片段的序列，前者为577bp，后 者为572bp。二者的核苷酸序列A、T、G、C的含量相似，分别为39．0％、35．7％、16．5％、8．8％； 39．3％、36．2％、15．8％、8．7％；不包括11处插入／缺失位点．两序列问有75个变异位点。核苷酸差异 率为13．18％．其中转换42个、颠换33个，转换与颠换比约为1．3。对国内外4种大眼蟹长度为331 bp的12SrRNA基因同源序列进行分析，A+T的平均含量为76．6％。明显高于G+C的平均含量。且 存有变异位点52个，简约信息位点25个。系统发生树的拓扑结构显示．所有的大眼蟹聚为一支，支持 大眼蟹类为一单系。 关键词：宽身大眼蟹；日本大眼蟹；12SrRNA；序列，系统发生 中图分类号：Q953 文献标识码：A 文章编号：1003—1111(2009)12-0779-04 大眼蟹(Macrophthalmus)属甲壳纲、十足目、料。 沙蟹科、大眼蟹亚科，其中宽身大眼蟹(Macroph- 1材料与方法 thalmusdilatatum)穴居于近海或河口处的泥滩， 1．1试验材料 日本大眼蟹(M．japonicus)穴居于近海潮间带或 河口处的泥沙滩，数量较大，是制作蟹稣、蟹酱的原 宽身大眼蟹和日本大眼蟹于2006年7月采于 料，具有一定的经济价值[1]。后来，沙蟹科中的猴 辽宁省大连沿海潮间带泥滩，浸制于95％的乙醇中 面蟹亚科独立为猴面蟹科[23；近来，一些学者根据 保存备用。每种取3个个体用于序列分析。 1．2试验方法 分子系统学的研究而将沙蟹科的大眼蟹亚科等4 DNA提取从宽身大眼蟹和日本大眼蟹的步足 个亚科分别提升为科，即Dotillidae、Heloeeiidae、 和螯足中取约50mg肌肉，采用传统法(酚／氯仿 Macrophthalmidae和Ocypodidae‘3。引。 抽提法)从肌肉组织中提取基因组DNA。将乙醇 动物线粒体DNA(mtDNA)因其分子量小、母 系遗传、比核DNA进化速率快等特征而广泛的应 沉淀后DNA溶解入40弘l超纯水，放入4℃冰箱6 12S h，--20℃保存备用。 用于进化生物学研究中；而mtDNArRNA基 因有较高的保守性，易于进行PCR引物的设计和 PCR扩增用于扩增12SrRNA基因片段的2 扩增，非常适合于种及其以上分类阶元的差异研 个引物的正向和反向核苷酸序列为：12L4：5’‘GT— 究m]。12SrRNA基因序列已被广泛用于蟹类的 分子系统学研究[7。1阳；而有关大眼蟹12SrRNA基 10x 因序列研究，仅见国外学者对2种大眼蟹即万岁大 时的反应体积为25肛l，反应液中含2．5肛l PCR