玉米CMS-S核恢复基因和玉米对淹水胁迫响应基因的功能分析.pdf

中文摘要 L．1是世界 杂种优势的利用是提高作物单位面积产量的有效途径。玉米(Zeamays 上最早利用杂种优势的作物之一。利用不育系进行杂交制种可以免去人工去雄，降 低了劳动成本、提高种子纯度，在杂种优势的利用中具有明显的优越性。为了更好 地发挥玉米不育系在杂种优势利用中的作用，在理论上阐明细胞质雄性不育(CMS) 和育性恢复机理具有重要的理论意义，同时在核质互作分子机理的研究领域中，CMS 已成为重要的模式性状。玉米CMS—S系的育性由线粒体上嵌合基因Dr7了55／0玎77和 因的表达进行许多研究，但核育性基因Rplrp的克隆，表达产物的鉴定、与线粒体 基因和其他核基因互作关系的阐明等仍有待继续深入的研究。本研究以nplrf3近等 (SSH)技术，在转录水平上对玉米CMS．S核恢复基因进行功能基因组学研究，得 到以下初步结果： 1、在玉米s．M017船啪生长的不同时期，分别提取不同组织的mRNA，构建了 玉米魏芽(含蘧芽鞘)、三睁麓妨萤(含鬏系)、淹拳缝理鑫靛三时裁幼萤(翕寝系)、 六叶期整株(含根系)、拔节期茎间居间生长组织、花药、授粉5天后的雌穗和开稳 麓藏熬时共8个cDNA文露；等量瀑合套文痒戆震粒DNA，采用蒸因缀DNA魄粒 ESTs，12％以上的捅入片段为现有核酸数据库中所没有同源序列的新序列，76％的 捶入序列爻寒爨功戆序列。cDNA炎隆{弋表?多个缀织寒发弯露絮黥RNA，置鼗表 高率度表达艇因的eDNA克隆所占比例低，平均每个持家熬因在文库中的频率约为 0。4％，能在均一化文瘴中戆测到低攀度表达基因的cDNA竟蹙。 测，姆扩增质量较好躲10830个竟隆的PCR产甥，点制农尾龙膜主，铡传cDNA 检测芯片廪霾，结聚表明，嚣复实验的芯片阕鑫对疲点的壤号强度秘芯片内两重复 点的信号强度的重复性较好，R2分剃为0．9728和0．965。 3、采用不适续蔗糖密度梯度离心，将不同发育状态的小魄子和花粉分为没有形 成液泡的小斑子(Y)，已形成多个小液泡的小孢子(SV)、形成了大液泡的小孢子 microarray杂交，续累显示， 隆数分别为7611、7494和7105个。小液泡期的基因袭达数目要比大波泡和艴粉充 实期的基蠢表选数器鼙多(117个帮506个)，大液遗发育辩静基因表达数器魄花籍 充实时期的多(392个)，基因表达的数目从小液泡期别花粉充实期呈现逐步减少的 趋势，这一绪采与不黼发育辩麓，j、孢予稻花耱肉实舔黔生理生纯欷嚣穗一致。(2) 大液泡与花粉充实初期之间的懑因表达差异最大，398个克隆存在4倍以上麓异， 占大终3．7％；大渡遣勰与毒液泡麓阁，4倍虢上差冥表达懿竞隧寿115个，占1．Q6％。 127令纂嚣按功髭可分为：兹狯菠育稻美基西19个，占15％意窟：痿号转导校关基 因16个，占约13％；代谢相关基因19个，约占15％；与蛋白质的合成和降解相关 魏羹辫16令，占13％；转录秘芙基西6个，占5％；臻壤转运褪关基落5令，占4％； 细胞防御和细胞凋亡棚关基因9个，占7％；米知功能的序列27条，约占20％，其 孛瑟发瑷懿廖到lO祭，鳕占8％。 杂交结祭相同。这些整异基因主要参与信号健群、膜系统形成、花粉的成熟以及抗 鳃胞衰送等生璎活动，但没有发现参与糖代谢、淀粉会成及其转运檩荧基因。 controlledtumor 关基因(Translationally protein-like 表现出显著差弗。Northern blot的结累乓芯片杂交的结果基本一致，并且cystatin、 Vdac2、B1．1鞠14-3．3等其有时空特异性表这特性。筏药稀花粉的DNA电泳诞实， S．(彬)花耪审也存程娃寡聚核糖钵为单位静DNA片段纯。在CMS-S花粉中，线 cl、ATP 8-subunit和 synthase 粒体上的呼吸链相关基因如Cox／／、Cytochrome reductase等异常表达，导致呼吸链中断和线粒体功能弊常。 6、滗较基瓣蕴方法将i5个感兴趣瀚玉米豁器帮蒸霞淳剃审翡6个镀定位在玉