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分子荧光法测定奎宁的含量
实验十 分子荧光法测定奎宁的含量 实验目的 1．了解仪器的性能与结构；熟悉仪器的操作步骤； 2．学会绘制激发光谱和荧光谱图：（即确定最大的λEX和λEm） 3．定量测定奎宁的含量（标准曲线法） 实验原理 奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250 nm和350 nm，荧光发射峰在450 nm。在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：If=kC 仪器与试剂 仪器： 日本岛津公司（SHIMADZU）RF-5301 PC型荧光分光光度 计。 试剂： （1）100.0μμg·mL-1奎宁储备液； （2）0.05 mol·L-1H2SO4溶液 实验步骤 1．系列标准溶液的配制 取6只25mL的容量瓶，分别加入10.0μg·mL-1奎宁标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，用0.05 mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。 2．绘制激发光谱和荧光发射光谱：（以1.2μg/mL的标样找最大λEm和λEX） 将λEX固定在350 nm,选择合适的实验条件,在400～600 nm范围内扫描即得荧光发射光谱(可排除λEX的干扰)，从谱图找出最大λEm值； 将λEM固定在450 nm,选择合适的实验条件,在200～400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱(可排除λEM的干扰)，从谱图找出最大λEX值. 3．绘制标准曲线 将激发波长λEX固定在350 nm（或250 nm）左右处，荧光发射波长λEM固定在450 nm左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度。 4．未知试样的测定 取4-5片奎宁药片，在研钵中研细，准确称取约0.1 g，用0.05 mol·L-1 H2SO4溶解，全部转移至l000 ml容量瓶中，以0.05 mol·L-1H2SO4稀释至刻度，摇匀。取此溶液2.0mL于100 mL容量瓶中，用0.05 mol·L-1H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀，在标准系列溶液同样条件下，测量试样的荧光发射强度。 5．绘制荧光强度If对奎宁溶液浓度C的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度Conc (μg/mL)，计算药片中奎宁的质量分数。 ω奎宁 = Conc (μg/mL) × 1000mL × 50 / 0.1g 注意事项 奎宁溶液必须当天配制、避光保存。 思考题 1．能用0.05 mol·L-1 HCl来代替0.05 mol·L-1 H2SO4稀释溶液吗？为什么？ 2．如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？ 3．哪些因素可能会对奎宁荧光产生影响？ * * *
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