树脂固定化β半乳糖苷酶制备低聚半乳糖.pdfVIP

第 １３卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ４ ２０１５年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ２０１５ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０４００４ 树脂固定化β 半乳糖苷酶制备低聚半乳糖 费俊杰，李冰冰，陈　 勇，应汉杰 （南京工业大学 生物与制药工程学院 国家生化工程技术研究中心，南京 ２１１８００） 摘　 要：以树脂为载体研究β 半乳糖苷酶固定化条件，来改善酶性质。 以吸附率和回收率最高的离子交换树脂 Ｉ００２为载体，通过先吸附后交联的方法固定β 半乳糖苷酶，优化固定化条件。 结果表明：加酶量为５１８ Ｕ（以１ｇ 树脂计），固定ｐＨ为６５，温度是２５ ℃，吸附时间１２ｈ，戊二醛体积分数为４％，交联温度是４０ ℃，时间是６ｈ 时，固 定化效果最好。 获得的固定化酶活可达１６２ Ｕ，固定酶回收率为３９１％，得到低聚半乳糖（ＧＯＳ）的产率为２４２％。 该研究为工业化利用固定化乳糖酶连续生产低聚半乳糖提供了技术依据。 关键词：β 半乳糖苷酶；固定化；低聚半乳糖；树脂 － － － 中图分类号：Ｑ８１４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０４ ００１７ ０６ Ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙβ⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｏｎｔｏ ｒｅｓｉｎｓ ＦＥＩＪｕｎｊｉｅ，ＬＩ Ｂｉｎｇｂｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｙｏｎｇ，ＹＩＮＧ Ｈａｎｊｉｅ （Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１１８００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ ｕｓｅｄ ｒｅｓｉｎ ａｓ ａ ｃａｒｒｉｅｒ ｔｏ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ β⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ． Ｃａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｒｅｓｉｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒ ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｃａｒｒｉｅｒ． Ｔｈｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｒｏｓｓ⁃ｌｉｎｋｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆβ⁃ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ．Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｅｎｚｙｍｅ ｌｏａｄ ５１８ Ｕ／ ｇ ｒｅｓｉｎ，ｐＨ ６５，２５ ℃， ｔｉｍｅ １２ ｈ；ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｆ ４％（ｖ／ ｖ）；ｔｈｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｉｎ ｃｒｏｓｓ⁃ｌｉｎｋｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｗａｓ４０ ℃，ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｗａｓ ６ ｈ． Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ １６２ Ｕ／ ｇ ｒｅｓｉｎ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｆｉｘｅｄ ｗａｓ ３９１％，ｔｈｅ ｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ （ＧＯＳ） ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ２４２％． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ