纳米二氧化钛对小鼠心肌细胞dnade损伤及叔丁基对苯二酚de拮抗作用【参考文献】.pdfVIP

姜文博 ，等．纳米二氧化钛对小 鼠心肌细胞 DNA 的损伤及叔丁基对苯二酚的拮抗作用 351 伤 ，并通过应用 Nrf2诱导剂 tBHQ进一步观察 Nrf2 点琼脂糖混匀 ，滴在第 1层胶上 ，作为第 2层胶 ；将 是否可拮抗 Nano-Ti02所致心肌细胞 的DNA损伤 ， 玻片浸入细胞裂解液 4℃裂解 12h；取 出玻片后置 以期为 Nano-TiO 中毒的化学预防和毒性机制研究 于水平 电泳槽 ，加入 电泳缓冲液 ，避光放置 30rain 提供实验依据 。 后 ，300mA、25V 避光 电泳 30rain；4℃ 中和液浸 洗 3次 ，1次／5分钟 ，并 晾干 ；溴化 乙锭染液染色。 材 料 和 方 法 (3)结果观察及数据处理 ：475nm紫外光源 ，在显微 镜下观察电泳结果。按 “弓”字形走 向，每个玻片观 实验动物 健康雄性 ICR小 鼠30只，体质量 察 100个细胞 ；数码相机摄取 彗星 图像 ，照片用 (22±2)g，由中国人民解放军军事 医学科学 院实验 CASP软件分析 ，测量尾部 DNA含量百分 比(tail 动物 中心提供[许可证号 ：SCXK一(军)2012一ooo4~。 DNA ，TD)、彗星尾矩 (olivetailmoment，0TM)。 试剂和仪器 (1)试剂：Nano-Ti02(25nm，纯度 ： 统计学分析 采用SPSS13．0统计软件对数据 99．7 ，批号 ：637254-50G，美国Sigma公司)，tBHQ(批 进行统计学处理 ，经方差齐性检验和正态性检验后 ， 号：1948—33-0，比利 时 Acros公司)；胰蛋 白酶 (中国 资料呈正态分布且方差齐者 ，采用方差分析 ；差异有 Biosharp公司)，小牛血清(天津四季青公司)，溴化乙锭 显著性者，进一步作 LSD检验进行两两 比较 ，并用 (美国AiTlresco公司)，琼脂糖 (西班牙 Biowest公司)， Spearman秩和相关分析方法计算各指标与 Nano— 低熔点琼脂糖。(2)仪器：BX53生物显微镜 (日本 TiO 间的关系。P0．05为差异有统计学意义。 Olympus公司)，KH-250DV型超声波清洗器 (昆山市 超声仪器有限公司)，DYY-6B型三恒 电泳仪 (北京市六 结 果 一 仪器厂)。 主要试剂 的配制 (1)Nano-Ti02溶液 ：Nano— 动物一般状态 实验过程中，各组小 鼠全部存 Ti02于 120℃加热2h进行无菌化处理 ，溶于无菌水 活 ，Nano—TiO：染毒后 ，染毒组动物较对照组活动量 配置成浓度分别为 5、10、20mg／mL的溶液 ，密封后 减少 。对照组和染毒组饮水和进食均正常，体质量 4℃保存 待 用。染毒 前 100Hz超声 振 荡 混匀 正常上升 。 30rain。(2)tBHQ溶液 ：称取适量 tBHQ，溶于3 乙 Nano-TiO：对心肌细胞 DNA 的损伤 结果显 醇+0．9 氯化钠溶液配制成浓度为 0．25mg／mL 示，对照组心肌细胞核圆形荧光团，强度均匀，边缘光 溶液。 滑，大小较一致，为彗星头部 ，无明显拖尾 (图 1A)。不 动物分组及 处理 取健康雄性 ICR 小 鼠 30 同剂量 Nano-Ti02染毒后，各组均存在不 同数量的 只，按体重随机分为6组。对照组 ：腹腔注射 3 乙 DNA受损心肌细胞 ，出现彗星拖尾现象，其尾部 的拖 醇 +0．996／氯化钠 溶液，30rain后灌 胃给 予水； 尾程度及荧光强度随 Nano-Ti02剂量的增加而提高 Nano-TiO低 (0．5g／kg)、中(1g／kg)、高 (2g／kg) (图1B～D)。采