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维生素C含量测定 1、2,6-二氯酚靛酚滴定法 2、碘量法 3、2,4-二硝基苯肼比色法2,4-二硝基苯肼比色法 方法原理 维生素C总量包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古乐糖酸，将样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，进一步水解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎。其呈色的强度与二酮古乐糖酸浓度成正比，可以比色定量。 17.2.3.2主要试剂 110 g·L-1草酸，20 g·L-1草酸； 2酸处理活性炭：取活性炭200g，加入1∶9HCl 1000mL，煮沸后，抽气过滤，再用沸水1000mL煮沸过滤，重复用水洗至溶液中无Fe2+离子(用10 g·L-1KSCN溶液试验无红色)，放在100~120℃烘干。 3 20 g·L-1 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼(分析纯)2.00g溶解于100mL 4.5mol·L-1 H2SO4中。 4 4.5mol·L-1 H2SO4溶液：量取浓H2SO4(分析纯)250mL，慢慢倒入750mL水中，边加边搅拌。 5 100 g·L-1硫脲溶液： 用500mL·L-1酒精溶液溶解5.00g硫脲(分析纯)，使其最终体积为50mL。 6 H2SO4(9∶1)溶液：量取浓硫酸90mL，慢慢倒入10mL水中。 7标准Vc溶液：称取维生素C(C6H8O5，分析纯) 20mg溶解于10 g·L-1草酸溶液中，移入100mL容量瓶中，并用10 g·L-1草酸溶液定容。吸取此溶液50mL，加入活性炭0.1g，摇1min，过滤。吸取此溶液5mL于100mL容量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释定容。此Vc工作液为10?g·mL-1。 17.2.3.3操作步骤 1.样品处理：称取适量样品(m)加等重量的20 g·L-1草酸溶液，在组织捣碎机中打成浆状。取浆状物20g用10 g·L-1草酸溶液移入100mL容量瓶中，定容过滤。 2.样品中总Vc的测定：取滤渡10mL，加入10 g·L-1草酸10mL(总Vc约1~10?g·mL-1)，加一勺活性炭。摇1min，静置过滤。 各取滤液2mL于样品管和样品空白管中，各管加入1滴硫脲溶液(注1)。于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5mL，两管都加上盖子，置于37℃保温箱中保温3h。然后取出样品管放入冰水中(终止反应)。样品空白管取出后冷却至室温，然后加入2,4-二硝基苯肼0.5mL。然后在样品管和样品空白管皆置于冰浴中，从滴定管中滴加9∶1硫酸溶液2mL于各管中，边滴边摇试管(防止溶液温度上升，溶液中糖炭化而转黑色)。 将各管从冰浴中取出，在室温下放置30min后(注2)，立即在分光光度计540nm波长比色，读取吸收值，根据吸收值从标准曲线查出相应含量。 3.标准曲线的绘制：吸取Vc标准工作液10，20，30，40，50mL稀释至50mL，即此系列含有2，4，6，8，10?g·mL-1的Vc标准溶液。各取2mL于各标准管中，以下操作步骤同上样品测定。以上述Vc浓度系列为横座标，以吸收值(A)为纵座标作标准曲线。 17.2.3.4结果计算 Vc总量(mg·kg-1) =?×20×1000/1000=?×20 式中 ?—从标准曲线查得的总抗坏血酸的含量(?g·mL-1)； 20—样品稀释倍数[(2m/m)×(100/20)×(20/10) = 20 ]； 1000—分别代表1000g样品中总Vc的含量和将?g换算成mg。 17.2.3.5 注释 注1.硫脲可防止Vc被氧化，且可帮助脎的形成，最终溶液中硫脲的浓度应一致，否则影响色度。 注2.加入H2SO4(9∶1)溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色会继续变深，所以必须准确加入H2SO4后30min内比色。 维生素A测定法　　本法是用分光光度法测定维生素A在特定波长处的吸收度来计算其含量，以单位表 示，每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg或全反式维生素A醇0.300μg。　　由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质，所测得的吸收度不是维生素A独有的吸收。在以下规定的条件下，非维生素A物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。　　校正公式系采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长若不够准确时，即会有较大误差，故在测定前，应校正仪器波长。　　测定应在半暗室中尽速进行。　　合成维生素A和天然鱼肝油中的维生素A是酯式维生素A。如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下列第一法测定的规定时，可直接用溶剂溶解供试品后测定；否则应按第二法，经皂化提取，除去干扰后测定。　　第一法　　取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量