蛋白质分离纯化鉴定 .pdfVIP

一，蛋白质的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质 则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化 蛋白质及酶。 （一）水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常 用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋 白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度 随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面， 温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采 用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解 酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。 下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。 1、pH值 蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电 点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可 解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质 用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。 2、盐浓度 稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质 部分结合，具有保护蛋白质不易变性的