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Fc-SWNTs 复合物在DNA 检测中的应用 杨晓英，马延风，卢艳红，陈永胜* 南开大学化学学院高分子化学研究所，天津（300071 ） E-mail ：yangxiaoying@, maggie@, luyanhong_2003@126.com, yschen99@ 摘 要：本文制备了一种包括一个固定在金电极上的探针 DNA （DNA-probe1 ）、一个目标 DNA 和一个连接在单壁碳纳米管/二茂铁复合物（Fc-SWNTs ）上的探针DNA （DNA-probe2 ） 在内的新型三明治式的基因检测系统。在这种基因检测体系中，Fc-SWNTs 能够显著放大检 测电极对过氧化氢的响应信号。检测结果表明目标DNA 能够通过Fc-SWNTs 对过氧化氢的 电化学催化作用选择性的并且灵敏的检测出来。 关键词：单壁碳纳米管，DNA ，电化学 1．引言 DNA 序列分析是揭开遗传密码的关键，是遗传工程中首先要解决的问题之一。人类许 多遗传疾病的早期诊断是通过检测已知碱基序列的DNA 是否出现变异来实现的，检测与疾 病有关的变异对基因筛选，遗传疾病的早期诊断和治疗具有十分深远的意义。核酸分子杂交 技术是定性和定量检测特异RNA 或DNA 序列片段的有力工具[1]，在核酸分子杂交分析中， 125 32 [2] 传统的方法主要是用 I 和 P 等放射性同位素标记 ，但是这种方法有许多难以克服的弊 端，不适用于常规分析，目前正被许多非放射性标记法所代替，但这些方法大都仍采用传统 的斑点杂交法和 Southern 印迹杂交法，检测过程操作繁琐复杂。基于荧光信号的测定是目 前DNA 检测的最准确方法，但所需仪器昂贵，且难以实现自动化。另外，聚合物酶链反应 [3] （PCR ）也已广泛用于感染病毒的测定 ，该方法虽有很高的灵敏度，但需要复杂的样品预 处理过程，分析时间较长，且难以定量检测目标基因。目前许多专家认为最有希望满足快速， 准确，简便，廉价等优点的DNA 检测器是DNA 生物传感器。DNA 生物传感器是分子生物 学与微电子学，电化学，光学等相结合的产物，使对目标DNA 的检测时间大大缩短，操作 简单，无污染，既可定性又可定量，且灵敏度高，选择性好。因而采用生物传感器测定DNA 序列的研究已形成热点。 DNA 生物传感器主要包括电化学传感器，光学传感器和压电传感器三种。其中 DNA 电化学传感器主要是指由DNA 修饰电极制作的传感器，一般是由一个支持DNA 片段的电 极（包括金电极、玻碳电极、裂解石墨电极和碳糊电极等）和检测用的电活性杂交指示剂构 成。由于探针DNA 与其互补序列杂交的高度序列选择性，使得该DNA 修饰的电极具有极 强的分子识别能力。DNA 探针分子与靶序列杂交后导致电极表面结构的改变，这种杂交前 后的差异可以通过电化学信号的改变来识别，从而达到检测的目的。其中DNA 序列在电极 表面的固定化和杂交指示是传感器研究的两大关键问题，已经有许多文献报导了各种形式的 DNA 固定技术和杂交检测方法。 由于SWNTs 具有优异的导电性，大的表面积和很高的长径比，因而可作为一种适合的 生物分子载体和电化学检测材料。文献中已经有不少工作是关于将SWNTs 应用于DNA 杂 交的电化学检测方面的，例如：Meyyappan[4]等人最初将探针 DNA 序列连接到碳纳米管阵 列上，以Ru(bpy)32+ 为媒介，通过检测目标DNA 序列上的鸟嘌呤的信号达到检测的目的。 方禹之[5]等将氧化的 MWNTs 修饰到玻碳电极表面，再通过共价键将氨基修饰的探针 DNA 序列连接到MWNTs 上，利用电活性物质道诺霉素在双股DNA 序列中的特异性镶嵌，检测 -1- ， [6 7] 目标DNA 的存在。Wang 等 将电活性物质CdS 粒子或碱性磷酸酯酶（ALP ）负载在SWNTs 上，用来起到放大电化学信号的作用，通过三明