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　第 35 卷 第 4 期 工 业 微 生 物 Vol . 35 No . 4 2005 年 12 月 Industrial Microbiology Dec . 2005 脂肪酶活力测定研究进展 郑 　毅 , 　叶海梅 , 　周 　　 , 　吴朝娟 , 　吴松刚 福建师范大学生物工程学院 ,福州 350007 摘 　要 　　脂肪酶催化作用发生在油 - 水界面上 ,是一种典型的界面酶 ,因此其活力测定有别于其 他的水相酶 。如何准确测定酶活力的大小 ,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义 。本文对 脂肪酶检测的常用方法进行了综述与评价 。 关键词 : 脂肪酶 ; 　活力测定 ; 　方法 脂肪酶 Lip ase EC3 . 1. 1. 3 . ,甘油酯水解酶 是 于定性 ,例如产脂肪酶微生物的筛选 、脂肪酶活性的 一类水解油酯的酶类 。脂肪酶的水解底物一般是天 初步判断等 ,如果用于定量 ,那么就应采用标准活性 然油脂 ,其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接 酶在同一测定平板中进行对照测定 ,才可消除测定 的酯键 。不同于其它水解酶 ,脂肪酶催化作用系统 的系统误差[2 ] 。 是一种非均相体系 。水溶性的酶催化作用发生在水 液体测定体系 :甘油三酯和水制成的乳胶 ,因胶 不溶性底物和水的界面上 。这种界面上的催化作用 束对入射光的吸收或散射具有乳浊性状 , 当胶束中 机制仍不甚清楚 , 不能简单用 MichaelisMenten 学 的甘油三酯在脂肪酶催化转变为甘油和脂肪酸 ,导 说解释酶与底物间的反应机制 。有人提出了脂肪酶 致胶束分裂 ,悬液散射光或浊度下降。通过检测甘 在油 —水界面上定位的假设 ,提出了“超底物”的模 油三酯乳化液在 340nm 或 365nm 的吸光度随时间 型 ,该模型能解释脂肪酶的一些行为 ,但还需要进一 的降低 ,来测定酶活力的大小 。例如英国 RANDOX 步的实验证明和修正 。此外 ,脂肪酶兼具有逆向催 公司提供 的试剂盒 , 其主要成分是 : t ris 缓冲液 化甘油和游离脂肪酸合成甘油脂活性[ 1 ] 。 26mmol/ L ,p H 9 . 2 、去氧胆酸钠 35 mmol/ L 、氯 由于脂肪酶独特的催化特性 ,活力测定具有以 化钙 4 mmol/ L ,三油酸甘油酯 0 . 3 mmol/ L ,col 下特点 : 1 方法的多样性 ; 2 测量过程影响因素的 ip ase 3 mmol/ L , 同时还备有脂肪酶标准液 。该方 复杂性 ; 3 酶活力定义的混乱性 。本文对脂肪酶活 法的缺陷是早期反应阶段的非线性及其线性范围有 力测定方法及影响因素进行综述 。 关 , 同时为了获得准确可靠的数值 ,用纯的脂肪酶溶 测定脂肪酶的方法可分三类 : 1 通过测定底物 液作标准曲线是必要的。目前该方法已成功用于血 的减少来度量酶活的大小 ; 2 测定产物增加判断酶 清脂肪酶的测定[3 ,4 ] 。 活的大小 ; 3 其他方法 。 另外一种浊度分析法是以吐温 20 溶液为底物同 时溶液中含有 CaCl2 ,通过监测 500nm 光密度的变化 , 1 　测定底物的减少量 测定酶活的大小。其原理吐温 20 溶液中的脂肪酸水 1. 1 　浊度测定法 　　固体测定体系 :在制作琼脂平 解释放出来并以钙盐的形式沉淀下来 ,从而改变溶液 板时加入脂肪酶的底物及有色指示剂 。在琼脂平板 的光密度 。这种浊度分析法 已成功检测从 Chro - 1 上点上待测脂肪酶 打孔加样或滤纸片点样 ,在脂 mobacterium viscos um 87 IU . mg 和 Candida cy lin - 1 [5 ] 肪酶水解作用下 ,加样点的周围出现透明圈 或颜色 dracea 0 . 5IU . mg 中提取出来的脂肪酶活性 。 1. 2 　Wil hel my 平板法 褪去 。根据透明圈 或褪色圈 的大小及透明 或褪 色 程度用于判断脂肪酶的活性大小 。此法主要用 通过检测界面张力的变化来测定脂肪酶的活力 福建省自然基金资助项 目,编号B02 10005 , 作者简介 :郑毅 1970～ ,男 ,副教授 。 — 36 — 第 4 期 第 35 卷 及动力学特征[6 ] [7 ] 。利用检测界面张力的仪器 ,将 定脂肪酸 , 根据 N aOH 的用量来计算脂肪酶活 脂类的单分子层膜在液相表面展开 ,通过探头铂板 力[ 10 ] 。滴定法是经典方法 ,其缺点 : 1 由于采用橄 由电子微平衡仪表感知表面张力的变化 。如在液相 榄油乳化液为底物 ,显乳白色会干扰酚酞