Neuroserpin在大鼠皮层星形胶质细胞缺氧复氧损伤中的作用和研究.pdfVIP

复旦大学硕士论文 摘要 Neuroserpin在大鼠皮层星形胶质细胞缺氧复氧损伤中的作用研究 中文摘要 缺血性脑卒中是引起人类死亡和致残的主要疾病之一。神经丝氨酸蛋白酶抑 nervous 白酶抑制剂，主要在中枢神经系统(Central 与调控CNS细胞外组织型纤溶酶原激活物(Tissue activator,tPA)、纤 plasm／nogen 维蛋白溶酶的蛋白水解的活性。研究表明，NSP对缺血的神经元或脑组织存在保 护作用。应用NSP治疗急性脑缺血患者可以降低缺血灶的体积，显著减少血脑屏 障(Blood-brainbarrier,BBB)渗漏、脑水肿程度，减少缺血再灌注所致的细胞凋 oxide，NO)等自由 少MG的白介素．1B(Interleukin-I，IL．1D)和一氧化氮(Nitric 基和炎性因子的释放。本研究观察星形胶质细胞缺氧复氧后细胞活性的变化，研 究NSP预处理对缺氧复氧后的星形胶质细胞活性是否存在影响。最后，探讨NsP 对缺氧复氧后的星形胶质细胞的这种影响的可能机制。我们拟通过本研究进一步 明确NSP神经保护机制。 第一部分 星形胶质细胞的培养和OGD后复糖复氧模型的建立 目的：构建星形胶质细胞OGD后复糖复氧模型为下一步实验创造条件。 方法：体外传代培养SD大鼠皮层星形胶质细胞并鉴定。建立缺氧复氧 (hypoxia／reoxygenafion、H／R)模型。 结果： l、传代培养的星形胶质细胞经GFAP特异性抗体的免疫荧光染色证实纯度达 95％以上 2、星形胶质细胞在糖氧剥夺6小时以后，细胞活性逐渐下降，及至12小时，星 形胶质细胞活性已明显低于正常对照(PO．05)。星形胶质细胞在糖氧剥夺12d 时后再复糖复氧时，随着复氧时间的延续，其活性持续下降。至复糖复氧24小时， 星胶细胞活力只有OGD前的一半左右。 一2一 复豆大学硕士论文 摘要 结论：传代星形胶质细胞缺氧复氧模型有效。 第二部分 NSP对OGD后复糖复氧星形胶质细胞的影响 目的：利用建立的OGD模型，探讨NSP能否影响OGD后复氧星形胶质细胞的活 性，并检测其炎症介质释放的变化情况。 方法： l、体外传代培养大鼠皮层星形胶质细胞并鉴定。建立星形胶质细胞缺氧复氧模 型。 的影响。细胞随机分成正常组、I-I／R组(OGDl2小时后复糖复氧24小时)、 胞l小时，然后OGDl2小时后复糖复氧24小时)。利用MTT法测定细胞存活 率、LDH泫测定细胞损伤程度。 3、NSP(Sng／m1)预处理对H／R星形胶质细胞的影响。细胞随机分成正常组、 NSP预处理星形胶质细胞l小时，然后OGDl2小时复糖复氧O、2、4、 (5ng／ml V-FITC和PI检测各组星形胶质细胞凋亡率。 细胞因子的影响。细胞随机分成正常组、H／R组(OGDl2ds时后复糖复氧0、6、 NSP预处理星形胶质细胞ld,时，然后OGDl2d时 12d,时)、NSP+H／R(5ng／ml 量分别进行测定。 结果： R24h) l、不同浓度的NSP预处理后，OGDl2小时后复糖复氧24小时(OGDl2h 的星形胶质细胞 的活力较对照组有明显的升高，而细胞毒性明显下降。在NSP较低浓度时，随 着其浓度的增加，星胶细胞的活力呈梯度上丁I‘，并于5ng／mI时达到其最大效应。 2、NSP预处理的星形胶质细胞，OGDl2小时后复糖复氧不同时间的星形胶质的 活力较相应复氧时间的对照组有明显的提升。流式细胞术结果显示，NSP预处理 的星形胶质细胞在OGD