菠菜Y染色体特异EST序列的快速克隆及其生物信息学分析.pdf

摘要 oleraceaL．)，又名波斯菜、田菜等，通常为雌雄异株植物，雌株和 菠菜(Spinacia 雄株在形态上有明显差异，雄株花常呈穗状，着生于花茎的顶端或叶腋处，雌株花常多 个花蕾成团着生于叶腋处，其性别决定方式为XY型，性染色体演化水平处于性染色体 演化的第二阶段。菠菜的染色体组(2n=12)较小，单个染色体组的基因组大约为1000 Mbp，是雌雄异株植物中研究植物性别分化非常好的实验材料。目前已有细胞学研究证 明菠菜最大的一条染色体(1号染色体)上具有性别决定相关的X、r、】，三个复等位 基因，为菠菜的性染色体，雄性菠菜的基因型为XY，雌性菠菜的基因型为XXo目前丘 F、】，三个复等位基因位点尚未被成功克隆，并且尚未有菠菜性染色体连锁功能基因克 隆的报道，同时菠菜的性别决定基因尚未被发现、性别决定分子机制尚不清楚。 基于上述问题，本研究采用染色体显微分离与杂交特异性扩增(hybridsequence 物与雄性菠菜开花期花的cDNA杂交，以雌性菠菜基因组作为封阻，构建了Y染色体 息学分析。本文获得了多个菠菜Y染色体特异表达的EST序3／0，为菠菜性别决定和性 别分化机制的研究提供了理论依据，同时为植物性染色体演化的研究提供了一定的研究 基础。主要研究成果如下： 1．成功对菠菜Y染色体进行了显微分离及DOP．PCR扩增，并进行了来源验证和分 析； 2．成功建立了一种新型的快速克隆菠菜Y染色体特异EST序列的技术方法体系； 3．构建了菠菜Y染色体上特异表达的cDNA文库，获得了90条有效的EST序列， 片段大小介于53～486 酸序列，物种分布于菠菜、无油樟、拟南芥、垂枝桦、蓖麻等植物中。经Blastx同源比 对分析，有25条EST序列具有同源的编码蛋白的核酸序列，物种分布于葡萄、水稻、 大洋洲滨藜等物种中。使用Blast2Go，以1 E．10作为临界值，进行EST序列的基因本 112个，占21．42％。 mRNA序列 基因则可能会导致雄性不育现象及染色体碎片的形成；EST序列SP5-13与蓖麻铁转运蛋 1．88％。 SP5．62与大洋洲滨藜S．腺苷．L．蛋氨酸合酶4的AnSAMS4mRNA序列相似性达8 雄性性别的分化及减数分裂过程中都起到一定的作用，可能对于菠菜的雄性性别决定起 到一定作用，但其作用机制还有待后续实验研究进行分析和验证；而未能获得比对结果 的序列，可能是菠菜中新发现的表达序列，其具体的功能还需要后续研究进行探索。 关键词：菠菜，Y染色体，显微分离，HSA，EST II ABSTRACT loeracea namedasPersian aredioecious cuisine，field Spinach(SpinaciaL．)，also vegetables，usually have differencesbetweenmaleand isthattheflower plants．Theresignificantmorphological female，which orleaf thefloweroffemale are ofmale are as onthe ofthestem plantsalwaysspica top axils，while plants bornintoa attheleafaxils．The mechanismof isXY always group sex-determin