肝细胞癌中GPC3和Notch1相互关系研究.pdf

㈣ 硕士研究生：彭瑶莉 指导教师：吴自勃副教授 李学农教授 摘要 研究背景和目的 carcinoma，HCC)在临床上恶性程度较高， 原发性肝细胞癌(Hepatocellular 是影响人类健康的重大疾病之一。我国是世界上肝癌高发区之一，发病率为 20．37／10万，位于常见肿瘤的第3位。每年全球肝癌的新发病人数有65万左右， 其中一半以上发生在我们国家。而在亚洲，我们占了每年新发病人数的80％以 上。虽然目前临床上可用于治疗肝癌的手段比较多，包括手术切除、肝移植、 血管介入、消融技术、放化疗等，且在肝癌的药物治疗上取得重大突破，但手 术切除仍被公认为肝癌获得根治的最好手段。然而，即使是根治性切除，5年内 仍有60-70％的病人出现转移复发，而局部治疗的转移复发率更高。如何预防 肿瘤转移复发已成为提高肝癌患者生存率的关键。因此，寻找预测肿瘤转移倾 向、判断肿瘤预后的标志物，探索预防和治疗的有效途径，从而降低死亡率， 提高肝癌患者的5年生存率，这是肝癌研究的重点内容，也是肿瘤防治研究中 的一个难点。 sulfate 杂糖复合物，广泛存在于细胞表面，通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞膜上。 OCI一5、GTXR2-2，基因片段全长大于900kb， glypican-3又称GPC3、MXR7、 摘要 是人类基因组中最大的基因之一。目前认为GPC3的HS链与大量生物效应分子 (如生长因子及其受体、细胞外基质蛋白和粘附分子等)相互作用，从而调节 细胞增殖、分化、粘附和迁移等，还可能参与抑制或调节大部分中胚层组织和 SMAD、TGF．p等多个与肿瘤发生发展密切相关的信号通路的调节；GPC3在肝 细胞癌、大肠癌、恶性黑色素瘤、Wilm’S瘤、成神经细胞瘤和肝胚细胞瘤高表 达，而在肺腺癌、卵巢癌、乳腺癌、间皮瘤中表达显著下调，提示GPC3在肿瘤 的发生发展中起着重要的作用，并且在不同的肿瘤中可能发挥的作用不同。据 研究，GPC3在人类肝癌组织中有显著的表达，与肝癌的发生发展关系十分密切。 Notch信号转导通路由一组在进化上高度保守的细胞膜配体、受体及下游分 号转导过程主要发生在细胞间，故Notch受体是由异二聚体组成的单跨膜分子， 其配体同样为跨膜分子。目前已发现的4种Notch受体的主要区别在于EGF重 复序列。Notch受体在作为受体的同时，也作为转录因子发挥巨大的作用。细胞间 受体配体作用可激活Notch信号转导过程，从而直接调节基因转录，使细胞基因 表达受相邻细胞调控。Notch信号在细胞分化、胚胎发育、组织自我更新过程中 均发挥了重要的作用，许多病理过程(包括肿瘤)都有Notch信号参与。Notch 信号多作为癌基因促进肿瘤生长，但在某些组织也可起到诱导细胞分化、抑制 肿瘤增殖的作用。肿瘤干细胞中Notch信号的改变可能发挥了关键性作用。有研 究观察到Notchl信号可能导致肝癌细胞周期停滞和凋亡，在肝癌中主要发挥抑 癌基因的作用，与肝癌的发生发展关系密切。 本课题的研究目的是通过检测GPC3及Notchl在肝癌细胞株中的表达情况， 然后改变肝癌细胞中GPC3的表达水平观察Notchl表达水平的变化，最后从组 与Notchl两者在肝细胞癌中的相互关系，为深入研究肝细胞癌的分子靶向治疗 靶点奠定理论基础。 硕士学位论文 方法 1．GPC3和Notchl在肝癌细胞株中表达情况的检测 7701和Bel．7402等5种肝癌细胞株中GPC3mRNA和NotchlmRNA的表达情 况，然后用Western 达水平。 2．构建干扰GPC3表达的重组质粒DNA 、 GPC3．1246．ShI埘A、 GPC3—1720-shRNA、 括 GPC3．809．shRNA 的DNA；对合成好的DNA片