BP方法二鱼油含量测定方法.docVIP

英国药典 附录XP. 富含Omega-3酸的油 脂肪酸的构成 欧洲药典 方法2.4.29 该方法可用于对不同浓度下的鱼油产品中Omega-3的EPA与DHA的定量测定。该方法适用于三酸甘油脂或乙酯类，其结果用三酸甘油脂或乙酯分别表达。 EPA and DHA 气相色谱分析（2.2.28）.执行快速操作，避免受到光，氧化性物质，氧化催化剂（例如：铜和铁）和空气的影响. 该方法可对待检测物质中的甲基酯或乙基酯（All-Z）二十碳五烯酸(EPA; 20:5 n-3)和(All-Z) 二十二碳六烯酸(DHA; 22:6 n-3)进行检测。 内部标准 二十三酸甲酯R 试验溶液(a) 根据表2.4.29-1, 将待检测样品与70mg 内标（二十三酸甲酯R）在50毫克/升丁基苯甲醇的三甲基戊烷溶液中溶解并用相同溶液稀释至10毫升。 对乙酯进行分析检测，对于甘油三酯，继续按步骤B中所述的进行。 B. 提出步骤A所获得的2毫升溶液放入石英管中，用平缓的氮气流R 蒸发溶剂。添加1.5毫升含量为20克/升氢氧化钠的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖紧，混合后放入水中加热7分钟。冷却。添加2毫升三氟化硼的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖紧，混合后放入水中加热30分钟。冷却至40到50 °C，添加1毫升三甲基戊烷溶液，盖紧后用力摇动30秒。立即添加5毫升饱和的氯化钠溶液，以氮气覆盖，盖紧后用力摇动15秒。转移上部混合层至另一真空管中。加1毫升的三甲基戊烷溶液再次摇匀甲醇层。清洗三甲基戊烷混合提取物2次，分别为1毫升水和干燥过的无水硫酸钠溶液。每个样品准备三个溶液。 试验溶液(b) 在50毫克/升丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解0.3克的样品，用同样的溶液稀释至10毫升。按照试验溶液(a)所描述的进行操作。 参考溶液(a) 在50 mg/l 丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解60毫克的二十二碳六烯酸乙酯CRS, 内标70毫克和90毫克的二十碳五烯酸CRS。用同样的溶液稀释至10毫升。当检测分析乙酯时按照试验溶液(a) A步骤进行操作。对于甘油三酯，继续按试验溶液(a)中的步骤B进行，每个样品准备三个溶液。 参考溶液(b) 在一个10毫升容量瓶中用 50 mg/l丁基羟基甲苯的三甲基戊烷溶液中的溶解0.3克的棕榈酸甲酯，0.3克硬脂酸甲酯，0.3克二十酸甲酯和0.3克的二十二酸甲酯，用同样的溶液稀释至10毫升。 参考溶液(C) 在一个10毫升容量瓶中用50mg/l丁基羟基甲苯的甲酯溶液溶解一个样品，该样品含55毫克的二十二碳六烯酸和大约5毫克的二十四碳-15-烯酸甲酯。用同样的溶液稀释至10毫升。 Column: 柱子 材料：石英玻璃 尺寸：l = 至少 25 m, ? = 0.25 mm, 固定相：聚乙二醇（膜厚度0.2 μm） 运载气体：氢气色谱分析法或氦气色谱分析法 流速：1毫升/分钟 分流比：1:200，或者不分流用温度控制（在注射前样品溶液需要在50毫克/升丁基羟基甲苯的三甲基戊烷溶液中稀释至1/200） 温度： 检测：火焰电离 注射：1 μl, 两次 系统适用性 -- 参考溶液(b) )获得的色谱图中，区域百分比含量按如下顺序递增：棕榈酸甲 酯，硬脂酸甲酯，二十酸甲酯，二十二酸甲酯。棕榈酸甲酯和二十而酸甲酯的区域百分比差异小于2.0区域单位。 -- 解析度：参考溶液(c)获得的色谱图中二十二碳六烯酸和二十四碳-15-烯酸甲酯的峰高之间最小值为1.2 --当与试验溶液(b)获得的色谱图进行比较的时候，试验溶液(a)获得的色谱图中，二十三碳酸甲酯和二十一碳五烯酸甲酯或乙酯(C21:5)的峰都是分开的（如果不是，需要使用矫正因子） 用下列公式计算EPA及DHA的百分含量，同时要考虑到参考物的指定值。 m1 = 试验溶液(a)中内标质量, 单位：毫克 m2 = 试验溶液(a)中待检测样品的质量，单位：毫克 m3 = .参考溶液(a)中内标质量，单位：毫克 mx,r = 参考溶液(a)中二十碳五烯酸乙酯CRS或二十二碳六烯酸乙酯CRS的质量，单位：毫克 Ax = 试验溶液(a)获得的色谱图中二十碳五烯酸酯或二十二碳六烯酸酯的峰面积 Ax ,r = 参考溶液(a)获得的色谱图中二十碳五烯酸酯或二十二碳六烯酸酯的峰面积 A1 = 试验溶液(a)获得的色谱图中内标的峰面积 A3 = 参考溶液(a)获得的色谱图中内标的峰面积 C = 乙酯和甘油三酸酯之间的转换因数 C=1.00 乙酯 C=0.954 EPA C=0.957 DHA 总Omega-3-脂肪酸 通过对EPA和DHA的试验分析，按如下公式计算总Omega-3酸，并通过色谱图确认各峰。 EPA + DHA + EPA= E