胡杨愈伤组织质膜的两相分离法及其H+ATae的特性Ps.pdfVIP

西北植物学报 2003，23(11)：1877— 1881 ActaBot．Borea1．一Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2003)11—1877—05 胡杨愈伤组织质膜的两相分离法 及其H+-ATPase的特性 杨颖丽 。，张 峰 ，赵敏桂 ，谢能中 ，张立新 (1中国科学 院寒 区旱 区环境与工程研究所 沙漠与沙漠化重点实验室 ，兰州 730000；2兰州大学 生命 科学学院 ，兰州 730000；3西北师范大学 生命科学学院，兰州 730070) 摘 要 ：以胡杨愈伤组织为材料 ，用 PEG 3350／DextranT500构成 的两相系统提取质 膜微囊 ，研 究质膜 H 一AT_ Pase的特性。结果显示 ：由6．3 PEG 3350、6．3 DextranT500、KC1、磷酸缓冲液 (pH 7．8)和蔗糖构成的两相系 统提取膜微囊 的H 一ATPase活性分别被Na3VO4、KNO3、NaN3抑制了约 75％、2．6 和 1．3 。方向性检测显示原 位膜微囊 占提取质膜微囊的 9O ，翻转膜微囊仅 占1O 。去垢剂对质膜 H+一ATPase活性的影响说 明 0．015 的 TritonX—100和0．O1 ～O．1 的Brij58适用于测定质膜H 一ATPase活性。Lineweaver—Burk动力学分析该酶的 j 值为 0．65mmol·L～，～为 37．59 rn0lPi·rag_1protein ·h～。研究结果表 明：两相法提取的质膜微囊主要 是正向密闭的膜微囊 ；胡杨愈伤组织质膜H 一ATPase的最适 pH为 6．5，最适温度为 37C左右 。 关键词 ：胡杨；愈伤组织；质膜 ；H 一ATPase 中图分类号 ：Q946．1 文献标识码 ：A Isolation ofplasmam embranefrom Populuseuphraticaby two—phasespartition andpropertiesofitsH+一ATPase YANG Ying—li ，ZHANG Feng ，ZHAO M in—gui。 XIE Neng—zhong ．ZHANG Li—xin (1KeyLaboratoryofDesertandDe sertification，ColdandAridRegionsEnvironmentalandEngineeringResearchInstitude．Chi— neseAcademyofScience，La nzhou730000，China 2SchoolofLifeSc ience，LanzhouUniversity，La nzhou730000，China；3Sc hool ofLifeScience，NorthwestNormalUniversity，La nzhou730070，China) Abstract：Plasmamembranevesiclesfrom Populuseuphratica calluswere isolated and purified by two— phasepartitioncomposedofDextran T一500andPEG 3350，andthepropertiesofplasmamembraneH+一 ATPasewereinvestigated．TheH+一ATPaseactivitiesinmembranepartialsfrom two—phasepartitionwere inhibitedabout75％，2．6 and1．3 byNa3VO4，KNO3andNaN3，respectively．900／4ofmembranevesi— cleswereright—sideout，andin—sideoutmembranevesicleswereonly 10 ． Investigationoftheeffectsof detergentsonplasmamembraneH十一ATPaseactivityindicatedthat0