mTOR、FKBP38在SOD1-G93A转基因小鼠中研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………小1 英文摘要………………………………………………………………………4 前言………………………………………………………………………7月iJ吾……………………………………………………………………．．．／ 材料与方法……………………………………………………………¨8 结果…………………………………………………………………叫14 附图…………………………………………………………………．．．16 附表……………………………………………………………………l9 讨论…………………………………………………………………㈡20 结论…………………………………………………………………．．,22 参考文献……………………………………………………………㈠23 综述 6 roTOR功能及调节通路………………………………………||l=2 致谢………………………………………………………………………㈠33 个人简历…………………………………………………………………．．i34 中文摘要 摘 要 lateral sclerosis，ALS)是1种 目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic 以运动神经元选择性丢失为特征的神经系统退行性疾病，其表现为肢体无 力和瘫痪，并最终发展至呼吸肌无力，进而危及生命，一般在发病后B．5 年死亡。目前，关于ALS发病机制的研究有很多，主要有遗传、谷氨酸盐 的毒性、氧化损伤、神经细丝的改变、蛋白质异常聚集、神经炎症、线粒 体变性、自身免疫、及自噬功能的异常等。近年来，自噬功能的异常逐渐 成为人们的研究热点。mTOR(mammalian target 类雷帕霉素的靶点，是关于细胞生长和新陈代谢的调节器。roTOR调节细 胞的过程，包括mRNA的翻译，核糖体的形成，自噬，以及新陈代谢筝。 通过对来自外界环境信号的整合，mTOR完成了对下游的调节与输出。 mTOR是自噬的关键调节点，在生长因子存在和营养丰富的情况下，使自 噬通路关闭，进而抑制自噬。雷帕霉素对mTOR有抑制作用，实验证明， 雷帕霉素可以通过抑制自噬的负性调节位点mTOR而激活自噬。生理条 in enriched 件下，111ToR的活动是受至URheb(Rashomologbrain)所调节的。 正性的激活作用。作为细胞生长的中心性质的调节者，通过营养和细胞生 长的信号来控制广谱的细胞活动。研究表明，Rheb对InToR的激活是通过 拮抗其内源性抑制剂FKBP38(FK506．bmding protein38)而完成的。 的神经保护作用和再生能力，表明了FKBP38的异构酶在调节细胞存清以 及稳定性上的能力。在生长因素缺乏或者氨基酸被剥夺的情况下，FKB]I)38 直接与mToR结合进而下调了mToR的活性。当氨基酸和生长因子再次恢 除了失活状态，恢复了活性。 中文摘要 其内源性抑制剂FKBP38的变化对自噬可能产生的影响。进而推断这一变 化在ALS中的意义，为ALS的进一步研究提供了理论依据。 方法：选取SODl一G93A转基因小鼠为实验组，根据病程及症状分为 症状前期组、症状期组、终末期组；选取100天的阴性小鼠作为对照组， 各组8只。通过腹腔注射水合氯醛对小鼠进行麻醉并处死。在4℃条件下 迅速剥离腰髓，置于EP管中，保存在．80℃超低温冰箱。用多聚甲醛固定 小鼠，分离小鼠腰髓，于多聚甲醛