IL-17A%2fG-CSF+axis对于免疫细胞的调控及在结肠炎相关结直肠癌发生发展中的作用的研究.pdf

目 录 目j畏……………………．………………………………………………………………………………………………………l 图表索引………………………………………………………………………………………．．1 中英文缩略词………………………………………………………………………………………3 中文摘要……………………………………………………………………………………………5 Abstract……………………………………………………………………………………………………………………………7 第—部分………………………………………………………………………………………………………………………．9 淋巴细胞依赖的小鼠炎症相关结直肠癌的发生与发展…………………………………………9 前言…………………………………………………………………………………………………………………………．．9 材料与方法……………………………………………………………………………………17 一、 实验材料…………………………………………………………………………．17 二、实验方法…………………………………………………………………………22 实验结果………………………………………………………………………………………26 一、 Aom．Dss小鼠炎症相关结直肠癌的构建及免疫细胞分析…………………………．26 1． AD小鼠结直肠癌模型的建立……………………………………………………．．26 2． IHC分析小鼠结直肠中免疫细胞的浸润…………………………………………．28 3． 流式分析小鼠结直肠中CD45+细胞的浸润………………………………………．29 4． 流式分析小鼠结直肠中T细胞的浸润……………………………………………32 5． 流式分析小鼠结直肠中B细胞的浸润……………………………………………34 6． 流式分析小鼠结直肠中MDSC的浸润……………………………………………．36 7． 流式分析小鼠结直肠中Macrophage的浸润………………………………………39 二、 淋巴细胞的缺失能够降低小鼠CAC的发生与发展…………………………………．42 1．SCID小鼠Aom+Dss的成瘤能力检测……………………………………………．42 2． 流式分析SCID小鼠结直肠中MDSC的浸润……………………………………．44 3． 4． 5． 讨论…………………………………………………………………………………………………………………………z19 d、l砉…………………………………………………………………………………………………………………………53 第二部分…………………………………………………………………………………………．54 前言………．…………………………………………．．……………………………………………………………………5zl 材料与方法……………………………………………………………………………………60 一、 实验材料…………………………………………………………………………。60 二、 实验方法…………………………………………………………………………65 实验结果………………………………………………………………………………………72 1． 2． Real．Time PCR检测C57与SCID小鼠结直肠中差异表达基因…………………77 3．Real．TimePCR检测IL．17A在人和小鼠结直肠肿瘤中的表达…………………．80 4． IL．17A在AD小鼠结直肠组织中的表达…………………………………………81 5． Real．Time PCR检测分选后T细胞中转录因子的表达……………………………82 6． G．CSF等细胞因子在小鼠结直肠组织及外周血中的表达………………………．．83 7． G．CSF与小鼠上皮细胞的共定位及体外实验……………………………………．84 8． G．CSF能够稳定MDSC的表型……………………………………………………．87 9． G．CSF能够促进MDSC的生长并抑制MDSC的凋亡……………………………89 10．Real．Time PCR检测分选后MDSC中