p38MAPK通路对Il-1β刺激肺成纤维细胞表达ICAM-1的影响.pdf

目 录 中文摘要………·…………………………………………………………··1 英文摘要……………………………………………………………………3 响 前言……………………………………………………………………6刖舌”“““”…““…一“”““…”一“………一…””一“………”…… 材料与方法……………………………………………………………6 结果……··…·………···………………………………………………15 OIOOQ……………………………………………………………17 附图…0 0000 附表……………………0 0…………………………………………19 讨{念·····………··…·…··…··…·····…·…·····……·………·…·…····20 结j沦……···…………···………-····…····…···……···…·…··………24 参考文献………………………………………………………………24 28 综述p38MAPK信号转导通路在肺脏疾病中的研究进展…………… 致谢…·……·……·····……···…·……···…·……··…………··……·…·…45 个人简历……………………………………………………………………46 中文摘要 路对IL．1B刺激肺成纤维细胞表达ICAM一1的影响 p38MAPK 摘 要 adhesion 目的：肺内成纤维细胞增殖、细胞间粘附分子(intercellular 化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径作为细胞内的主要信息传递系统之一， 可以将细胞外的信息传递至细胞核中，可能参与肺纤维化的形成及发展过 程。本研究在体外培养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，观察IL．1p对肺成纤维 中的作用及可能涉及的细胞因子，深入研究肺纤维化的发病机制，并为其 提供可能的治疗靶点。 方法：Wistar胎鼠肺成纤维细胞培养：乙醚吸入麻醉临产Wistar孕鼠， 取出胎鼠，开胸取出胎鼠肺组织，将支气管及结缔组织剔除，然后剪成l 养基，吹打均匀后涂于培养瓶。待细胞铺满瓶底后进行传代，在传代过程 中去除红细胞、上皮细胞及残余组织块等，使用结构、形态一致的第5～6 代成纤维细胞进行实验。 将培养的肺成纤维细胞分为三组(每组6复孔)，(1)对照组：应用只 Western blotting法测定P．p38MAPK、AP．1／Jun蛋白的表达水平。 结果： 1 成功培养Wistar胎鼠原代肺成纤维细胞：本实验采用组织培养技术培 养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，5～10h后显微镜下观察到组织块周围有圆形 细胞游走出，1周左右，这种细胞逐渐变为椭圆或菱形，并呈放射状，足 变长，相邻细胞间融合，互相连接，细胞核明亮，大且圆。经过2-3次胰 中文摘要 酶消化纯化，逐渐清除上皮细胞、红细胞及残留的组织块等，然后可见到 较接近理想实验模型的肺成纤维细胞：形态一致，胞体丰满，胞质均匀， 核仁清晰，生长良好，存在核分裂相。 2 RT-PCR技术检测ICAM．1mRNA在肺成纤维细胞中表达水平的变化 ICAM．1mRNA表达量为(O．887±O．051)，与对照组相比均明显升高 3 Western 达水平的变化 在肺成纤维细胞中p．p38MAPK蛋白存在一定量的基础表达，对照组 p组中为(0．492 ±0．010)，明显低于IL．1 13坌Hp．p38MAPK蛋白的表达水平(P0．05)。 0．002)；IL．1 蛋白表达水平(尸O．05)。 结论： 1在正常肺成纤维细胞中有一定量低水平ICAM．1，IL．1