播散性念珠菌病小鼠肾脏中HSP90及其TLR4表达及其相关性的研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………．1 英文摘要………………………………………………………………………6 前言……………………………………………………………………．12一 刚舌……………………………………………………………………．1 材料与方法……………………………………………………………．13 结果……………………………………………………………………．19 附图…………………………………………………………………．22 附表……………………………………………………………………．39 讨论……………………………………………………………………43 结论……………………………………………………………………46 参考文献……………………………………………．．．………………47 综述Toll样受体的研究进展……………………………………………50 致谢…………………………………………………………………………．．59 个人简历……………………………………………………………………．．60 中文摘要 播散性念珠菌病小鼠肾脏中HSPgO及TLR4表达 及相关性研究 摘 要 目的：播散性念珠菌病发病与机体的天然免疫和特异性免疫有 关。尤其是天然免疫在发病中的作用越来越受到重视。TLRs是宿主 识别各种病原体相关分子模式，并激活和调节天然免疫．适应性免疫反 应的一类模式识别受体。白念珠菌表面的特征性糖磷脂甘露聚糖可 被TLR4识别，通过诱导前炎性细胞因子的释放及促进中性粒细胞的 shock 聚集等来介导宿主的抗真菌免疫反应。热休克蛋白(Heat 生物中的蛋白质，加热、缺氧、感染、氧化剂等刺激因素都可诱导其 表达增加。HSP除参与机体的氧化应激反应外，还参与机体的天然免 疫过程。HSP90是近年来研究与白念珠菌感染密切相关的一类分子。 致NF—KB因子和MAPK激酶的激活实现的。本研究通过建立播散性 念珠菌病感染小鼠动物模型，探讨HSP90及TLR4在播散性念珠菌 病小鼠肾脏的表达及HSP90及TLR4表达的相关性，探讨其在播散 性念珠菌病发病的免疫机制，为免疫及生物治疗提供理论依据。 方法： l实验菌株白念珠菌，来源于河北医科大学第二医院皮肤性病 科真菌检查室保存菌种。 2建立播散性念珠菌病小鼠模型 昆明小鼠90只，清洁级，雌雄各半，5～6周龄，2025g，由河 北医科大学实验动物中心提供。经过适应环境，按体重随机分成A、 B、C三组，每组小鼠各30只。A组为实验组：在实验的第1天通过 天。B组环磷酰胺对照组：在实验的第1天经腹腔连续4天注射同等 量的环磷酰胺，第5天时，经腹腔注射生理盐水0．2mL／只，共1天。 中文摘要 C组空白对照组：在实验第1天经腹腔连续5天注入同等量的生理盐 水。分别于实验第6天、第9天、第20天分三批处死小鼠，观察小 鼠腹腔内部脏器大体情况。 3鉴定播散性念珠菌感染小鼠肾脏菌株 无菌条件下解剖小鼠取出肾脏，用无菌生理盐水冲洗肾脏组织数 次，将小鼠1／2肾脏组织研磨，在沙氏培养基上接种培养。 4组织病理学检查和免疫组化检测 剩余肾脏组织用10％福尔马林固定，进行常规病理HE染色和 PAS染色，观察小鼠肾组织白念珠菌感染情况和病理变化。运用免疫 组织化学方法(链霉菌抗生素蛋白一过氧化物酶连接法SP)检测 HSP90和TLR4的表达情况。 结果： 1建立播散性念珠菌病感染小鼠模型 实验过程中，小鼠由于注射环磷酰胺免疫抑制剂造成多个脏器水 肿、出血共死亡11只；由于白念珠菌播散感染共死亡12只；不明原 因共死亡13只。最后，纳入实验的总计54只小鼠。A组小鼠在实验 第6d，饮食和精神稍差，毛发没有光泽，呼吸正常。解剖小鼠见腹 腔内部分脏器明显水肿，未见白色脓点形成；实验第9d，解剖小鼠 见腹腔内各脏器白色脓点形成；实验第20d，解剖小鼠见腹