不同时期鼻咽腔降温对全脑缺血再灌注大鼠谷氨酸及Bcl-2、Bax影响.pdfVIP

中文摘要 不同时期鼻咽腔降温对全脑缺血再灌注大鼠 谷氨酸及Bel．2、Bax的影响 摘 要 目的：采用Pulsinelli四血管阻断法致大鼠全脑缺血再灌 注模型，并在不同时期实施鼻咽腔亚低温，观察海马CAl 区细胞外液谷氨酸(Glutamic Bcl．2、Bax蛋白表达的变化，探讨鼻咽腔亚低温对全脑缺血 再灌注损伤的脑保护时间窗。 方法： l实验分组及动物模型制备 一 实验动物中心提供)。随机分为4组(每组6只)，常温组(A 组)，缺血前降温组(B组)，缺血即刻降温组(C组)和再灌注 大鼠后，于颈后正中第一、二颈椎处切开皮肤，剥离显露双 侧翼小孔．烧灼两侧的椎动脉使其闭塞。24小时候后，再次 麻醉大鼠，气管插管，吸氧，保留自主呼吸。手术过程中间 断给予水合氯醛维持麻醉，持续监测直肠温度。右股静脉切 开置管以lml／h的速度输入乳酸钠林格氏液。作颈前正中切 开，分离出双侧颈总动脉，用4．O丝线穿过颈总动脉，备用， 部分缝合颈部伤口。两侧鼻腔插入自制硅胶管并固定，深度 5mm。动物立体固定后，头皮刺入电极，持续监测脑电图 (EEG)，四肢皮下刺入电极，持续监测心电图(ECG)。切开头 中文摘要 度探头刺入大脑皮侧2mm，同样的方法将微透析探针刺入左 侧海马CAl区，以2．5 I_tl／min的速度注入乳酸钠林格氏液， 操作结束l小时脑电图波形稳定后，开始持续收集脑组织微 透析液，间隔时间为10min，直至再灌注后2h。室温保持在 250C。之后按照实验分组给予不同处理。(1)常温组(A组)： 整个实验中保持大鼠直肠和海马温度均为37±O．50C，动脉 夹夹闭双侧颈总动脉20min再灌注。(2)缺血前降温组(B组)： 通过鼻腔内置入的硅胶管，输入50C生理盐水，速度为 脉20min再灌注，通过调节输入生理盐水的速度保持海马温 夹闭双侧颈总动脉同时开始鼻咽腔降温，使海马温度降至33 再灌注即刻降温组(D组)：夹闭双侧颈总动脉20min后，再 灌注即刻实施鼻咽腔降温至海马温度为33±0．50C，并维持 此温度1h。后三组低温结束后缓慢复温至降温前水平。以上 四组均通过保温维持直肠温度37±0．50C。 2标本的采集及检测方法 2．1海马CAl区细胞外液谷氨酸浓度的检测 微透析液收集后保存在-700C。利用高效毛细管电泳法 测定出各种浓度的谷氨酸标准品的峰面积，并绘制标准曲 线、求得回归方程。利用该方法测出每个样品中谷氨酸的峰 面积，根据回归方程求得谷氨酸的浓度。 2．2 Bcl．2、Bax表达的检测 再灌注8h后，大鼠深麻醉经左心室一升主动脉插管，灌 中文摘要 注生理盐水50 m1以冲洗血液，然后快速灌注4％多聚甲醛 溶液50lnl，待全身僵硬后，断头打开颅骨完整取出脑组织， 浸入4％多聚甲醛溶液中固定。Bcl．2、Bax免疫组化测定采 用SP法进行，按照试剂盒要求步骤依次进行。 结果： 1缺血中各组间海马CAl区[Glu]e比较 低(PO．05)； 差别无统计学意义p0．05)。 (pO．05)。 2再灌注期间各组海马CAl区[Glu]。比较 均明显低于A组(氏O．05)。与D组比较，B、C两组均明显降低 衅O．01)。 ∽O．05)。 的比较 需时间分别为40min、20min、20min并130min。 4各组间海马CAl区Bcl．2表达的比较 中文摘要 ∽0．05)。 5各组间海马CAl区Bax表达的比较 义(胗0．05)。 结论： 1不同时期鼻咽腔降温对脑缺血再灌注损伤均有一定 保护作用。 2从谷氨酸变化观察，鼻咽腔降温实施越早，脑保护作 用越显著。 关键词：脑缺血；低温；鼻咽腔；谷氨酸；时间窗；Bax； Bcl．2 英文摘要 Effectsof Onsetson